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- 2025年07月09日
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29
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详见说明书
- CAS号：
详见说明书
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100次/500次/3000次/10000次
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
产品名称：细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）图片
英文名称：
产品规格：100次/500次/3000次/10000次
发货周期：1～3天
产品原理： Cell Counting Kit（细胞增殖与毒性检测试剂盒）是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒，其性能优于目前市面上进口的CCK-8试剂盒。
WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下，可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜（Formazan）。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。
使用方法:
1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。
注意事项：
细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）图片尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
碳酸氢钠shēng huà shì jì容量：1克
881四二钠盐水合物EDTA diwo7ium
蔗糖酶shēng huà shì jì容量：RT1克
62羟甲基 6Bromo2(hydroxymethyl)pyridine,% 3363 1G 通用试剂
果糖测试盒 比色法 50管/样 国产
铜，英文名或英文缩写：Copper，级别：BR，99.5%，规格：100克
29铟INDIUM nitnATE
3bromo2Thiopxenecarboxylic acid etxyl ester 622240
L古洛糖酸γ内酯 LGulonic acid γlactone,99% 8230 5G 通用试剂
崩溃酶(20℃) Nc
(R)4完酮5羧酸，英文名或英文缩写：DPyroglutamic acid，级别：BR，99%，规格：5克
6201红色担体NA
LY237地红霉素5KUBR
1,7二基皇嘌呤 ~98% 1,7DIMqTHYLXcNTHINq 6
二十一烷醋酯(28℃) MqTHYL HqNqICOScNOcTq 60600
BGC823(人胃癌细胞) 5×106cells/瓶×2
BHK-21(仓鼠细胞) 5×106cells/瓶×2
BIU-87(人膀胱癌细胞) 5×106cells/瓶×2
BRL-3A(大鼠正常肝细胞) 5×106cells/瓶×2
细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）图片HNE2, 人鼻咽癌细胞系 Human
人B淋巴细胞瘤细胞;RAMOS(RA.1)
C2 Others Mouse 小鼠 C2 / Compleme Compone 2 人细胞裂解液 (阳性对照)
大鼠垂体瘤细胞;GH3 膀胱移行细胞癌细胞，T24细胞 MDBK (NBL-1)细胞，牛肾细胞
间充质干细胞生长添加物MSCGS
LUM Others Human 人 LUM / Lumican / LDC 人细胞裂解液 (阳性对照)
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
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文献和实验一、实验原理 细胞活力检测试剂盒(CCK-8) 可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。 其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法
CCK-8较MTT法测定细胞增殖/毒性实验，步骤更简便，灵敏度更高，重复性更好 第一 从基础操作方面对比 CCK-8 方法 MTT方法 1 还原后的甲�物为水溶性，不需要溶解 还原后的甲�物位非水溶性的，需要有机溶剂溶解
在细胞培养实验过程中，大家是不是总会好奇别人家的实验总是做的又快又好，而自己做的实验又慢又难得做出自己满意的结果，搞得一天到晚也挺忙的，心想：我也很努力很认真啊，为啥效率总提不起来呢？其实，有时候并不是自己不努力，只是没有找对方法。做实验可不能光是埋头苦干，还要学会运用合适的检测试剂盒，这样就能事半功倍。如果你还在用 MTT，那就真的 OUT 了，MTT 花 4 小时才能得到的结果用 CCK-8 只需 1 小时，CCK-8 可用于细胞增殖和毒性分析，同 MTT 法相比，CCK-8 即开即用
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