pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒)

pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒)

pFastBac1-EGFP是以pFastBac1为基础构建的用于在昆虫细胞表达EGFP的质粒。在polyhedrin (PH)启动子的作用下，可以高效启动EGFP在昆虫细胞(如Sf9和Sf21等)中的表达。
在采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达目的蛋白时，pFastBac1-EGFP可以用作监测转染、病毒包装和目的蛋白表达效果的对照质粒。表达的EGFP有很强的绿色荧光，在荧光显微镜下可以非常方便地观察转染、病毒包装和表达的效果。
pFastBac1是基于Bac-to-Bac杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac Baculovirus Expression System)而设计的表达载体。Bac-to-Bac杆状病毒表达系统是由Luckow等人于1993年发展的一种快速而有效产生重组杆状病毒的方法。该系统主要包括以下两个组分：(1)用于插入目的基因的pFastBac载体，目的基因如EGFP等插入后受杆状病毒特异性启动子(baculovirus-specific promoter) polyhedrin启动子调控表达；(2)含杆状病毒穿梭载体bacmid (bMON14272, 136kb)和辅助质粒(helper plasmid，用于表达转座必须的转座蛋白)的大肠杆菌DH10Bac宿主菌株(D0346)。将pfastBac重组质粒转化该菌株可发生pfastBac重组质粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7发生转座，从而形成重组的bacmid。位点特异的转座会破坏宿主的lacZα基因，从而可通过蓝白斑筛选重组克隆。PCR等方法鉴定重组克隆后，提取重组的bacmid转染昆虫细胞，可以产生重组杆状病毒，并表达目的蛋白如EGFP等。扩增重组的杆状病毒并感染昆虫细胞，就可以大量表达纯化目的蛋白了。
pFastBac1-EGFP质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
f1 origin	2-457
Ampicillin resistance gene	589-1449
pUC origin	1594-2267
Tn 7R	2511-2735
Gentamicin resistance gene	2802-3335
Polyhedrin promoter (PPH)	3904-4032
EGFP	4038-4757
SV40 polyadenylation signal	4794-5021
Tn 7L	5050-5215

pFastBac1-EGFP质粒(5397bp)的图谱如下：

pFastBac1-EGFP的详细图谱如下：

	BamHI EGFP
4031	CGGATCC ATG	GTGAGCAAGG	GCGAGGAGCT	GTTCACCGGG	GTGGTGCCCA
	GCCTAGG TAC	CACTCGTTCC	CGCTCCTCGA	CAAGTGGCCC	CACCACGGGT
4081	TCCTGGTCGA	GCTGGACGGC	GACGTAAACG	GCCACAAGTT	CAGCGTGTCC
	AGGACCAGCT	CGACCTGCCG	CTGCATTTGC	CGGTGTTCAA	GTCGCACAGG
4131	GGCGAGGGCG	AGGGCGATGC	CACCTACGGC	AAGCTGACCC	TGAAGTTCAT
	CCGCTCCCGC	TCCCGCTACG	GTGGATGCCG	TTCGACTGGG	ACTTCAAGTA
4181	CTGCACCACC	GGCAAGCTGC	CCGTGCCCTG	GCCCACCCTC	GTGACCACCC
	GACGTGGTGG	CCGTTCGACG	GGCACGGGAC	CGGGTGGGAG	CACTGGTGGG
4231	TGACCTACGG	CGTGCAGTGC	TTCAGCCGCT	ACCCCGACCA	CATGAAGCAG
	ACTGGATGCC	GCACGTCACG	AAGTCGGCGA	TGGGGCTGGT	GTACTTCGTC
4281	CACGACTTCT	TCAAGTCCGC	CATGCCCGAA	GGCTACGTCC	AGGAGCGCAC
	GTGCTGAAGA	AGTTCAGGCG	GTACGGGCTT	CCGATGCAGG	TCCTCGCGTG
4331	CATCTTCTTC	AAGGACGACG	GCAACTACAA	GACCCGCGCC	GAGGTGAAGT
	GTAGAAGAAG	TTCCTGCTGC	CGTTGATGTT	CTGGGCGCGG	CTCCACTTCA
4381	TCGAGGGCGA	CACCCTGGTG	AACCGCATCG	AGCTGAAGGG	CATCGACTTC
	AGCTCCCGCT	GTGGGACCAC	TTGGCGTAGC	TCGACTTCCC	GTAGCTGAAG
4431	AAGGAGGACG	GCAACATCCT	GGGGCACAAG	CTGGAGTACA	ACTACAACAG
	TTCCTCCTGC	CGTTGTAGGA	CCCCGTGTTC	GACCTCATGT	TGATGTTGTC
4481	CCACAACGTC	TATATCATGG	CCGACAAGCA	GAAGAACGGC	ATCAAGGTGA
	GGTGTTGCAG	ATATAGTACC	GGCTGTTCGT	CTTCTTGCCG	TAGTTCCACT
4531	ACTTCAAGAT	CCGCCACAAC	ATCGAGGACG	GCAGCGTGCA	GCTCGCCGAC
	TGAAGTTCTA	GGCGGTGTTG	TAGCTCCTGC	CGTCGCACGT	CGAGCGGCTG
4581	CACTACCAGC	AGAACACCCC	CATCGGCGAC	GGCCCCGTGC	TGCTGCCCGA
	GTGATGGTCG	TCTTGTGGGG	GTAGCCGCTG	CCGGGGCACG	ACGACGGGCT
4631	CAACCACTAC	CTGAGCACCC	AGTCCGCCCT	GAGCAAAGAC	CCCAACGAGA
	GTTGGTGATG	GACTCGTGGG	TCAGGCGGGA	CTCGTTTCTG	GGGTTGCTCT
4681	AGCGCGATCA	CATGGTCCTG	CTGGAGTTCG	TGACCGCCGC	CGGGATCACT
	TCGCGCTAGT	GTACCAGGAC	GACCTCAAGC	ACTGGCGGCG	GCCCTAGTGA
	HindIII
4731	CTCGGCATGG	ACGAGCTGTA	CAAGTAA AAG	CTTGTCGAGA	AGTACTAGAG
	GAGCCGTACC	TGCTCGACAT	GTTCATT TTC	GAACAGCTCT	TCATGATCTC

pFastBac1-EGFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pFastBac1-EGFP)包括：

AatII	Acc65I	AfeI	AflII	AgeI	ApaI	AscI
AsiSI	BbvCI	BfuAI	BlpI	BmgBI	BmtI	BsiWI
BspDI	BspMI	BssHII	BstAPI	BstBI	BstEII	Bsu36I
ClaI	CspCI	Eco53kI	EcoNI	EcoO109I	EcoRI	FseI
KasI	KpnI	MluI	NarI	NdeI	NheI	NotI
NruI	NsiI	PacI	PaeR7I	PflMI	PluTI	PmeI
PmlI	PpuMI	PshAI	PspOMI	PspXI	PstI	PvuII
RsrII	SacI	SalI	SbfI	SexAI	SfiI	SfoI
SgrAI	SmaI	SpeI	SphI	SrfI	StuI	SwaI
TspMI	XbaI	XcmI	XhoI	XmaI	ZraI

      pFastBac1-EGFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pFastBac1-EGFP once)包括：

NgoMIV	G`CCGG,C	127		BsmBI	CGTCTCN`NNNN,	3182
NaeI	GCC|GGC	129		PflFI	GACN`N,NGTC	3228
BanII	G,RGCY`C	157		Tth111I	GACN`N,NGTC	3228
BsaHI	GR`CG,YC	836		BbsI	GAAGACNN`NNNN,	3757
PvuI	CG,AT`CG	1005		SnaBI	TAC|GTA	3881
FspI	TGC|GCA	1153		AccI	GT`MK,AC	3883
AlwNI	CAG,NNN`CTG	1852		BstZ17I	GTA|TAC	3884
BseYI	C`CCAG,C	1960		BsmFI	GGGAC(N)10`NNNN,	4000
TfiI	G`AWT,C	2290		BamHI	G`GATC,C	4032
SapI	GCTCTTCN`NNN,	2381		NcoI	C`CATG,G	4036
BspQI	GCTCTTCN`NNN,	2381		HindIII	A`AGCT,T	4758
MscI	TGG|CCA	2709		MfeI	C`AATT,G	4873
BstXI	CCAN,NNNN`NTGG	2713		HpaI	GTT|AAC	4886
SacII	CC,GC`GG	2766		BclI	T`GATC,	5022
BaeI	,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5`	2798		AvrII	C`CTAG,G	5037
EcoRV	GAT,ATC	2825

pFastBac1-EGFP的全序列信息请参考信裕生物的网站上该质粒的信息。
pFastBac1-EGFP质粒使用信裕生物研发的LipoInsect™转染试剂(C0551)转染SF9细胞的效果参考图1。

图1. pFastBac1-EGFP质粒转化DH10Bac，获得的重组bacmid用信裕生物生产的LipoInsect™转染试剂(C0551)转染SF9细胞4天后的效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
XY-2802	pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒)	1μg
—	说明书	1份

保存条件： 
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。