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pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒)
一年
上海信裕生物科技有限公司
-20℃保存。
1μg;100μg
pFastBac1-EGFP是以pFastBac1为基础构建的用于在昆虫细胞表达EGFP的质粒。在polyhedrin (PH)启动子的作用下,可以高效启动EGFP在昆虫细胞(如Sf9和Sf21等)中的表达。
在采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达目的蛋白时,pFastBac1-EGFP可以用作监测转染、病毒包装和目的蛋白表达效果的对照质粒。表达的EGFP有很强的绿色荧光,在荧光显微镜下可以非常方便地观察转染、病毒包装和表达的效果。
pFastBac1是基于Bac-to-Bac杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac Baculovirus Expression System)而设计的表达载体。Bac-to-Bac杆状病毒表达系统是由Luckow等人于1993年发展的一种快速而有效产生重组杆状病毒的方法。该系统主要包括以下两个组分:(1)用于插入目的基因的pFastBac载体,目的基因如EGFP等插入后受杆状病毒特异性启动子(baculovirus-specific promoter) polyhedrin启动子调控表达;(2)含杆状病毒穿梭载体bacmid (bMON14272, 136kb)和辅助质粒(helper plasmid,用于表达转座必须的转座蛋白)的大肠杆菌DH10Bac宿主菌株(D0346)。将pfastBac重组质粒转化该菌株可发生pfastBac重组质粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7发生转座,从而形成重组的bacmid。位点特异的转座会破坏宿主的lacZα基因,从而可通过蓝白斑筛选重组克隆。PCR等方法鉴定重组克隆后,提取重组的bacmid转染昆虫细胞,可以产生重组杆状病毒,并表达目的蛋白如EGFP等。扩增重组的杆状病毒并感染昆虫细胞,就可以大量表达纯化目的蛋白了。
pFastBac1-EGFP质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
f1 origin | 2-457 |
Ampicillin resistance gene | 589-1449 |
pUC origin | 1594-2267 |
Tn 7R | 2511-2735 |
Gentamicin resistance gene | 2802-3335 |
Polyhedrin promoter (PPH) | 3904-4032 |
EGFP | 4038-4757 |
SV40 polyadenylation signal | 4794-5021 |
Tn 7L | 5050-5215 |
pFastBac1-EGFP质粒(5397bp)的图谱如下:
pFastBac1-EGFP的详细图谱如下:
BamHI EGFP | |||||||||
4031 |
|
GTGAGCAAGG | GCGAGGAGCT | GTTCACCGGG |
|
||||
|
CACTCGTTCC | CGCTCCTCGA | CAAGTGGCCC |
|
|||||
4081 | TCCTGGTCGA | GCTGGACGGC | GACGTAAACG | GCCACAAGTT |
|
||||
AGGACCAGCT | CGACCTGCCG | CTGCATTTGC | CGGTGTTCAA |
|
|||||
4131 | GGCGAGGGCG | AGGGCGATGC | CACCTACGGC | AAGCTGACCC |
|
||||
CCGCTCCCGC | TCCCGCTACG | GTGGATGCCG | TTCGACTGGG |
|
|||||
4181 | CTGCACCACC | GGCAAGCTGC | CCGTGCCCTG | GCCCACCCTC |
|
||||
GACGTGGTGG | CCGTTCGACG | GGCACGGGAC | CGGGTGGGAG |
|
|||||
4231 | TGACCTACGG | CGTGCAGTGC | TTCAGCCGCT | ACCCCGACCA |
|
||||
ACTGGATGCC | GCACGTCACG | AAGTCGGCGA | TGGGGCTGGT |
|
|||||
4281 | CACGACTTCT | TCAAGTCCGC | CATGCCCGAA | GGCTACGTCC |
|
||||
GTGCTGAAGA | AGTTCAGGCG | GTACGGGCTT | CCGATGCAGG |
|
|||||
4331 | CATCTTCTTC | AAGGACGACG | GCAACTACAA | GACCCGCGCC |
|
||||
GTAGAAGAAG | TTCCTGCTGC | CGTTGATGTT | CTGGGCGCGG |
|
|||||
4381 | TCGAGGGCGA | CACCCTGGTG | AACCGCATCG | AGCTGAAGGG |
|
||||
AGCTCCCGCT | GTGGGACCAC | TTGGCGTAGC | TCGACTTCCC |
|
|||||
4431 | AAGGAGGACG | GCAACATCCT | GGGGCACAAG | CTGGAGTACA |
|
||||
TTCCTCCTGC | CGTTGTAGGA | CCCCGTGTTC | GACCTCATGT |
|
|||||
4481 | CCACAACGTC | TATATCATGG | CCGACAAGCA | GAAGAACGGC |
|
||||
GGTGTTGCAG | ATATAGTACC | GGCTGTTCGT | CTTCTTGCCG |
|
|||||
4531 | ACTTCAAGAT | CCGCCACAAC | ATCGAGGACG | GCAGCGTGCA |
|
||||
TGAAGTTCTA | GGCGGTGTTG | TAGCTCCTGC | CGTCGCACGT |
|
|||||
4581 | CACTACCAGC | AGAACACCCC | CATCGGCGAC | GGCCCCGTGC |
|
||||
GTGATGGTCG | TCTTGTGGGG | GTAGCCGCTG | CCGGGGCACG |
|
|||||
4631 | CAACCACTAC | CTGAGCACCC | AGTCCGCCCT | GAGCAAAGAC |
|
||||
GTTGGTGATG | GACTCGTGGG | TCAGGCGGGA | CTCGTTTCTG |
|
|||||
4681 | AGCGCGATCA | CATGGTCCTG | CTGGAGTTCG | TGACCGCCGC |
|
||||
TCGCGCTAGT | GTACCAGGAC | GACCTCAAGC | ACTGGCGGCG |
|
|||||
HindIII | |||||||||
4731 | CTCGGCATGG | ACGAGCTGTA |
|
CTTGTCGAGA | AGTACTAGAG | ||||
GAGCCGTACC | TGCTCGACAT |
|
GAACAGCTCT | TCATGATCTC |
pFastBac1-EGFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pFastBac1-EGFP)包括:
AatII | Acc65I | AfeI | AflII | AgeI | ApaI | AscI |
AsiSI | BbvCI | BfuAI | BlpI | BmgBI | BmtI | BsiWI |
BspDI | BspMI | BssHII | BstAPI | BstBI | BstEII | Bsu36I |
ClaI | CspCI | Eco53kI | EcoNI | EcoO109I | EcoRI | FseI |
KasI | KpnI | MluI | NarI | NdeI | NheI | NotI |
NruI | NsiI | PacI | PaeR7I | PflMI | PluTI | PmeI |
PmlI | PpuMI | PshAI | PspOMI | PspXI | PstI | PvuII |
RsrII | SacI | SalI | SbfI | SexAI | SfiI | SfoI |
SgrAI | SmaI | SpeI | SphI | SrfI | StuI | SwaI |
TspMI | XbaI | XcmI | XhoI | XmaI | ZraI |
pFastBac1-EGFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pFastBac1-EGFP once)包括:
NgoMIV | G`CCGG,C | 127 | BsmBI | CGTCTCN`NNNN, | 3182 | |
NaeI | GCC|GGC | 129 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3228 | |
BanII | G,RGCY`C | 157 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3228 | |
BsaHI | GR`CG,YC | 836 | BbsI | GAAGACNN`NNNN, | 3757 | |
PvuI | CG,AT`CG | 1005 | SnaBI | TAC|GTA | 3881 | |
FspI | TGC|GCA | 1153 | AccI | GT`MK,AC | 3883 | |
AlwNI | CAG,NNN`CTG | 1852 | BstZ17I | GTA|TAC | 3884 | |
BseYI | C`CCAG,C | 1960 | BsmFI | GGGAC(N)10`NNNN, | 4000 | |
TfiI | G`AWT,C | 2290 | BamHI | G`GATC,C | 4032 | |
SapI | GCTCTTCN`NNN, | 2381 | NcoI | C`CATG,G | 4036 | |
BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 2381 | HindIII | A`AGCT,T | 4758 | |
MscI | TGG|CCA | 2709 | MfeI | C`AATT,G | 4873 | |
BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 2713 | HpaI | GTT|AAC | 4886 | |
SacII | CC,GC`GG | 2766 | BclI | T`GATC, | 5022 | |
BaeI | ,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` | 2798 | AvrII | C`CTAG,G | 5037 | |
EcoRV | GAT,ATC | 2825 |
pFastBac1-EGFP的全序列信息请参考信裕生物的网站上该质粒的信息。
pFastBac1-EGFP质粒使用信裕生物研发的LipoInsect™转染试剂(C0551)转染SF9细胞的效果参考图1。
图1. pFastBac1-EGFP质粒转化DH10Bac,获得的重组bacmid用信裕生物生产的LipoInsect™转染试剂(C0551)转染SF9细胞4天后的效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
XY-2802 | pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒) | 1μg |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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