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pET-Dual-N-GST
一年
上海信裕生物科技有限公司
-20℃保存。
1μg;100μg
pET-Dual-N-GST是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒,其中一种蛋白可以带上GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)。本质粒包含两个多克隆位点(MCS),每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点 (rbs),因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。
在共表达两个蛋白的复合物时,通常宜把较难表达的基因克隆到第一个多克隆位点,并在其N端引物设计时加入PreScission蛋白酶识别的八肽序列(LEVLFQGP),宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过GST柱纯化,可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物,配合使用碧云天生产的PreScission Protease (P2302/P2303) 4℃酶切过夜,第二天收集穿柱液即可获得蛋白复合物,这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了极大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间,因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然,本质粒也可以只在第一个多克隆位点插入目的基因,这样就会仅表达一个含有N端GST标签的目的蛋白。
pET-Dual-N-GST质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
T7 transcription start-1 | 1 |
GST-taq coding sequence | 71-727 |
Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI) | 730-780 |
T7 promoter-2 | 838-854 |
T7 transcription start-2 | 855 |
Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI) | 922-983 |
S Tag coding sequence | 990-1034 |
T7 terminator | 1086-1133 |
f1 origin | 1171-1618 |
bla(Ap) coding sequence | 1743-2600 |
pBR322 origin | 3361 |
lacI coding sequence | 4555-5637 |
T7 promoter-1 | 6028-6044 |
pET-Dual-N-GST质粒(6044bp)的图谱如下:
pET-Dual-N-GST的多克隆位点的详细图谱如下:
Lacoperator | |||
1 | GGGGAATTGT GAGCGGATAA CAATTCCCCT CTAGAAATAA TTTTGTTTAA | ||
CCCCTTAACA CTCGCCTATT GTTAAGGGGA GATCTTTATT AAAACAAATT | |||
rbsGST | |||
51 | CTTTAAGAAG GAGATATACC ATGGGCTCCC CTATACTAGG TTATTGGAAA | ||
GAAATTCTTC CTCTATATGG TACCCGAGGG GATATGATCC AATAACCTTT | |||
101 | ATTAAGGGCC TTGTGCAACC CACTCGACTT CTTTTGGAAT ATCTTGAAGA | ||
TAATTCCCGG AACACGTTGG GTGAGCTGAA GAAAACCTTA TAGAACTTCT | |||
151 | AAAATATGAA GAGCATTTGT ATGAGCGCGA TGAAGGTGAT AAATGGCGAA | ||
TTTTATACTT CTCGTAAACA TACTCGCGCT ACTTCCACTA TTTACCGCTT | |||
201 | ACAAAAAGTT TGAATTGGGT TTGGAGTTTC CCAATCTTCC TTATTATATT | ||
TGTTTTTCAA ACTTAACCCA AACCTCAAAG GGTTAGAAGG AATAATATAA | |||
251 | GATGGTGATG TTAAATTAAC ACAGTCTATG GCCATCATAC GTTATATAGC | ||
CTACCACTAC AATTTAATTG TGTCAGATAC CGGTAGTATG CAATATATCG | |||
301 | TGACAAGCAC AACATGTTGG GTGGTTGTCC AAAAGAGCGT GCAGAGATTT | ||
ACTGTTCGTG TTGTACAACC CACCAACAGG TTTTCTCGCA CGTCTCTAAA | |||
351 | CAATGCTTGA AGGAGCGGTT TTGGATATTA GATACGGTGT TTCGAGAATT | ||
GTTACGAACT TCCTCGCCAA AACCTATAAT CTATGCCACA AAGCTCTTAA | |||
401 | GCATATAGTA AAGACTTTGA AACTCTCAAA GTTGATTTTC TTAGCAAGCT | ||
CGTATATCAT TTCTGAAACT TTGAGAGTTT CAACTAAAAG AATCGTTCGA | |||
451 | ACCTGAAATG CTGAAAATGT TCGAAGATCG TTTATGTCAT AAAACATATT | ||
TGGACTTTAC GACTTTTACA AGCTTCTAGC AAATACAGTA TTTTGTATAA | |||
501 | TAAATGGTGA TCATGTAACC CATCCTGACT TCATGTTGTA TGACGCTCTT | ||
ATTTACCACT AGTACATTGG GTAGGACTGA AGTACAACAT ACTGCGAGAA | |||
551 | GATGTTGTTT TATACATGGA CCCAATGTGC CTGGATGCGT TCCCAAAATT | ||
CTACAACAAA ATATGTACCT GGGTTACACG GACCTACGCA AGGGTTTTAA | |||
601 | AGTTTGTTTT AAAAAACGTA TTGAAGCTAT CCCACAAATT GATAAGTACT | ||
TCAAACAAAA TTTTTTGCAT AACTTCGATA GGGTGTTTAA CTATTCATGA | |||
651 | TGAAATCCAG CAAGTATATA GCATGGCCTT TGCAGGGCTG GCAAGCCACG | ||
ACTTTAGGTC GTTCATATAT CGTACCGGAA ACGTCCCGAC CGTTCGGTGC | |||
BamHIEcoRISacIAscI | |||
701 | TTTGGTGGTG GCGACCATCC TCCAAAACAG GATCCGAATT CGAGCTCGGC | ||
AAACCACCAC CGCTGGTAGG AGGTTTTGTC CTAGGCTTAA GCTCGAGCCG | |||
NotI | |||
PstISalIHindIII | |||
751 | GCGCCTGCAG GTCGACAAGC TTGCGGCCGC ATAATGCTTA AGTCGAACAG | ||
CGCGGACGTC CAGCTGTTCG AACGCCGGCG TATTACGAAT TCAGCTTGTC | |||
T7 promoter2 | |||
801 | AAAGTAATCG TATTGTACAC GGCCGCATAA TCGAAATTAA TACGACTCAC | ||
TTTCATTAGC ATAACATGTG CCGGCGTATT AGCTTTAATT ATGCTGAGTG | |||
T7 transcription-2→ | |||
|
|||
851 | TATAGGGGAA TTGTGAGCGG ATAACAATTC CCCATCTTAG TATATTAGTT | ||
ATATCCCCTT AACACTCGCC TATTGTTAAG GGGTAGAATC ATATAATCAA | |||
rbsNdeIBglIIMunIEcoRVFseI | |||
901 | AAGTATAAGA AGGAGATATA CATATGGCAG ATCTCAATTG GATATCGGCC | ||
TTCATATTCT TCCTCTATAT GTATACCGTC TAGAGTTAAC CTATAGCCGG | |||
AatIIKpnI XhoI | |||
951 | GGCCACGCGA TCGCTGACGT CGGTACCCTC GAGTCTGGTA AAGAAACCGC | ||
CCGGTGCGCT AGCGACTGCA GCCATGGGAG CTCAGACCAT TTCTTTGGCG |
pET-Dual-N-GST中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST)包括:
AgeI | AleI | BbvCI | BmgBI | BmtI | BseRI | BsiWI |
BsmI | Bsu36I | CspCI | NheI | NruI | NsiI | PmeI |
PmlI | PspAI | RsrII | SacII | SexAI | SfiI | SmaI |
SnaBI | SpeI | SrfI | StuI | TspMI | XmaI |
pET-Dual-N-GST中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST once)包括:
XbaI | T`CTAG,A | 30 | AvaI | C`YCGR,G | 978 |
NcoI | C`CATG,G | 69 | PaeR7I | C`TCGA,G | 978 |
MscI | TGG|CCA | 281 | XhoI | C`TCGA,G | 978 |
BstBI | TT`CG,AA | 471 | AvrII | C`CTAG,G | 1057 |
SwaI | ATTT|AAAT | 501 | BlpI | GC`TNA,GC | 1075 |
BamHI | G`GATC,C | 730 | DraIII | CAC,NNN`GTG | 1404 |
EcoRI | G`AATT,C | 736 | PsiI | TTA|TAA | 1528 |
Eco53kI | GAG|CTC | 744 | SspI | AAT|ATT | 1608 |
SacI | G,AGCT`C | 742 | AhdI | GACNN,N`NNGTC | 1812 |
BfuAI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 748 | BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 1874 |
BspMI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 748 | BglI | GCCN,NNN`NGGC | 1930 |
AscI | GG`CGCG,CC | 749 | FspI | TGC|GCA | 2035 |
PstI | C,TGCA`G | 755 | AlwNI | CAG,NNN`CTG | 3006 |
SalI | G`TCGA,C | 761 | BstZ17I | GTA|TAC | 3651 |
HindIII | A`AGCT,T | 767 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3676 |
NotI | GC`GGCC,GC | 774 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3676 |
AflII | C`TTAA,G | 787 | Bpu10I | CC`TNA,GC | 4313 |
BsrGI | T`GTAC,A | 814 | PpuMI | RG`GWC,CY | 4413 |
NdeI | CA`TA,TG | 922 | HpaI | GTT|AAC | 4780 |
BglII | A`GATC,T | 929 | PspoMI | G`GGCC,C | 5075 |
MunI | C`AATT,G | 935 | ApaI | G,GGCC`C | 5075 |
EcoRV | GAT|ATC | 943 | BstEII | G`GTNAC,C | 5100 |
FseI | GG,CCGG`CC | 948 | MluI | A`CGCG,T | 5282 |
AsiSI | GCG,AT`CGC | 959 | BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 5603 |
ZraI | GAC|GTC | 968 | SphI | G,CATG`C | 5811 |
AatII | G,ACGT`C | 966 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 5963 |
Acc65I | G`GTAC,C | 972 | BspDI | AT`CG,AT | 6007 |
KpnI | G,GTAC`C | 972 | ClaI | AT`CG,AT | 6007 |
PspXI | VC`TCGA,GB | 978 |
pET-Dual-N-GST质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
MCS1-C Primer (832-813): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′
MCS2-N Primer (813-832): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
T7 terminator Primer (1072-1090): 5′-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
pET-Dual-N-GST的全序列信息:D2931 pET-Dual-N-GST.txt。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
XY-2931-1μg | pET-Dual-N-GST | 1μg |
XY-2931-100μg | pET-Dual-N-GST | 100μg |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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