碧云天的BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, High ROX)是一种用于实时荧光定量PCR,即qPCR (Quantitative PCR)或real-time PCR的高品质预混液,主要用于cDNA和基因组DNA等的特异性超高灵敏度定量检测。 BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, High ROX)使用SYBR Green I作为染料。SYBR Green I是一种结合于双链DNA(double-strand DNA, dsDNA)双螺旋小沟区域的绿色荧光染料。SYBR Green I在游离状态下的荧光比较微弱,一旦与双链DNA结合后,其荧光会大大增强。这样通过检测荧光强弱就可以定量检测PCR过程中扩增产生的双链DNA的数量。 本产品使用的BeyoFast™ Taq DNA Polymerase是一种与抗体结合的高品质热启动酶,能够实现便捷高效的热启动。BeyoFast™ Taq DNA Polymerase中的Taq酶与抗Taq酶的单克隆抗体相互结合,从而抑制了Taq酶的DNA聚合酶活性,这样可以有效避免在低温条件下由引物和模板DNA非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。在PCR反应的预变性步骤中抗体会被加热失活,这样可以确保仅在预变性后才会把Taq酶的活性释放出来,预变性之前不会发生DNA聚合反应,从而大大提高了PCR反应的特异性、灵敏度和定量检测的准确性。 本产品包含了BeyoFast™ Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料、稳定剂和镁离子等所有的通用组分,使操作更简单、使用更便捷。用户只需自备引物、样品DNA和去离子水即可。 本产品含高浓度ROX,适用于需高浓度ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪。ROX的作用是用于校正与PCR无关的荧光波动,从而最大限度减少孔间差异。这种差异可能由多种因素引起,如移液误差及样品蒸发等。不同的荧光定量PCR仪对ROX的要求不同,请根据实际所用仪器选择含高浓度ROX (High ROX)、低浓度ROX (Low ROX)或不含ROX的BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X)。通常含高浓度ROX的BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, High ROX)也可以用于不需要ROX或需要低浓度ROX的荧光定量PCR仪。常用仪器所需ROX类型请参考如下表格。
添加ROX类型
适用PCR仪
不需添加
Bio-Rad: CFX384, CFX96,MiniOpticon, iCycler IQ, MyiQ and iQ5; Eppendorf: Mastercycler ep realplex and realplex2 s; Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 6000; Roche: LightCycler 480; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR
Low ROX
ABI: 7500(Fast), ViiA 7, QuantStudio 6 and 7 Flex Systems; Stratagene: Mx3000P, Mx3005P and Mx4000; Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 3000; Bio-Rad/MJ: Chromo4, Opticon 2 and Opticon
High ROX
ABI GeneAmp 5700; ABI PRISM 7000, 7700; ABI 7300, 7900HT(Fast); ABI StepOne(Plus)