党参LAMP鉴定试剂盒说明书

产品名称：党参LAMP鉴定试剂盒说明书
英文名称：Radix codonopsis
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年

产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
储存条件：
14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
L-赖氨酸甲酯盐酸盐  L-Lysine methyl ester dihydrochloride  质量规格：0.98 RatPyruvateKinase,M2-PKELISAKit大鼠同酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA试剂盒规格：96T/48T
L-蛋氨酸甲酯盐酸盐  L-Methionine Methyl Ester Hydrochloride  质量规格：>98% HISTONEH3蛋白共沉淀分析试剂盒5
胆硫酸酯钠盐  Sodium cholesteryl sulfate  质量规格：>98%,BR MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor1,VEGFR-1/Flt1ELISA试剂盒小鼠血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)ELISA试剂盒规格：96T/48T
O-叔丁基-L-丝氨酸甲酯盐酸盐  O-tert-Butyl-L-serine methyl ester hydrochloride  质量规格：0.98 小鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP3α)ELISA试剂盒 ，英文名： MIP3α ELISA Kit
L-缬氨酸甲酯盐酸盐  L-Valine methyl ester hydrochloride   质量规格：>98%,BR 人5核苷酸酶(5-)ELISA检测试剂盒Human5-Nucleotidase,5-ELISAKit 96T/48T
L-缬氨酰胺盐酸盐  L-Valinamide hydrochloride   质量规格：>98%,BR 大鼠血管生成素样蛋白6(ANGPTL6)试剂盒 Rat Angiopoietin-like 6,ANGPTL6 ELISA KIT
半胱胺盐酸盐  Cysteamine Hydrochloride  质量规格：>99%,BR 英文名称Ratprogesterone(PROG)ELISAkit大鼠孕同(PROG)ELISAKit规格：96T/48T
甘氨酰胺盐酸盐  Glycinamide hydrochloride  质量规格：0.98 高效CHIPDNA分子克隆试剂盒10
L-羟脯氨酸甲酯盐酸盐  L-4-Hydroxyproline methyl ester hydrochloride  质量规格：>98%,BR ELISAKitINH-B人抑制素B规格：48T/96T
D-亮氨酸甲酯盐酸盐  D-Leucine methyl ester hydrochloride  质量规格：>98%(T) 小鼠巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA试剂盒 ，英文名： MIP-2 ELISA Kit
党参LAMP鉴定试剂盒说明书氟化镍四水(>98%,BR)  Nickel (II) fluoride tetrahydrate  质量规格：>98%,BR 非同位素HRP化学发光法DNA南方杂交试剂盒5
二氧化硅(>99.9%,BR)  Silicon (IV) oxide  质量规格：>99.9%,BR 非同位素HRP化学发光法RNA北方杂交试剂盒5
氟化锶(>97%,BR)  Strontium fluoride  质量规格：>97%,BR 非突触体脑组织线粒体分离试剂盒10
丁香醛(>98%,BP)  Syringaldehyde  质量规格：>98%,BP 非吸烟者人体肺组织S9组分(5毫克/毫升)500微升
四氮唑紫(>98%,BS)  Tetrazolium violet  质量规格：>98%,BS 非吸烟者人体肺组织微粒体组分(5毫克/毫升)500微升
2-甲基吲哚(>97%，BR)  2-Methylindole  质量规格：>97%，BR 分离高尔基体度双酶法(GT/NCR)检测试剂盒20
硫酸铵铝十二水(>98%,BR)  Aluminum ammonium sulfate, dodecahydrate  质量规格：>98%,BR 分离溶酶体度双酶法(COX/AP)检测试剂盒20
AMP缓冲液(>98%,BR)  AMP buffer concentrate  质量规格：>98%,BR 分离线粒体度双酶法(SDH/AP)检测试剂盒20
苯并咪唑(>98%,BR)  Benzimidazole  质量规格：>98%,BR 分子生物级化乙锭(EthidiumBromide)染色液(1毫克/毫升)或(10毫克/毫升)100毫升
羧肽酶 B >170 U/mg  Carboxypeptidase B  质量规格：BC 酚藏花红(PHENOSAFRANINE)植物细胞繁殖测定试剂盒100
非同位素HRP化学发光法DNA斑点杂交试剂盒5 N,N'-二琥珀基碳酸酯(>98%,EP)  N,N'-Disuccinimidyl carbonate (DSC)  质量规格：>98%,EP
非同位素HRP化学发光法DNA南方杂交试剂盒5 氟化镍四水(>98%,BR)  Nickel (II) fluoride tetrahydrate  质量规格：>98%,BR
非同位素HRP化学发光法RNA北方杂交试剂盒5 二氧化硅(>99.9%,BR)  Silicon (IV) oxide  质量规格：>99.9%,BR
非突触体脑组织线粒体分离试剂盒10 氟化锶(>97%,BR)  Strontium fluoride  质量规格：>97%,BR
非吸烟者人体肺组织S9组分(5毫克/毫升)500微升 丁香醛(>98%,BP)  Syringaldehyde  质量规格：>98%,BP
非吸烟者人体肺组织微粒体组分(5毫克/毫升)500微升 四氮唑紫(>98%,BS)  Tetrazolium violet  质量规格：>98%,BS
分离高尔基体度双酶法(GT/NCR)检测试剂盒20 2-甲基吲哚(>97%，BR)  2-Methylindole  质量规格：>97%，BR
分离溶酶体度双酶法(COX/AP)检测试剂盒20 硫酸铵铝十二水(>98%,BR)  Aluminum ammonium sulfate, dodecahydrate  质量规格：>98%,BR
分离线粒体度双酶法(SDH/AP)检测试剂盒20 AMP缓冲液(>98%,BR)  AMP buffer concentrate  质量规格：>98%,BR
分子生物级化乙锭(EthidiumBromide)染色液(1毫克/毫升)或(10毫克/毫升)100毫升 苯并咪唑(>98%,BR)  Benzimidazole  质量规格：>98%,BR
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。