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文献和实验3。当肿瘤细胞在3D肿瘤球培养5代后，在3dGRO™球体培养基中生长时，A ALDHhigh肿瘤干细胞群的富集发生。 细胞活力检测 按照CellTiter-Glo® 3D细胞活力检测方案进行。简要来说，解冻CellTiter-Glo® 3D试剂，花30分钟时间让试剂和检测板平衡到室温。 按1：1稀释比例（表2）将CellTiter-Glo® 3D试剂加到孔中。将微孔板在轨道微孔板振荡器上振荡5分钟混匀溶液，接着在室温孵育，总耗时30分钟。孵育后，用微孔板检测仪读取发光信号。 注意：对于0时间点（细胞
的微孔板MTP。 ―加入5ul扩增产物，15-25℃孵育10分钟。 ―每个离心管内加入225ul杂交缓冲液，用振荡器完全混匀。 （如需要，杂交混合物量可以用于二次检测扩增产物。） ―取出100ul混合物加入试剂盒中已包被的微孔板的每个孔中，并用盖子盖住小孔以防蒸发。 ―将MTP微孔板置于37℃，300rpm的振荡器中孵育2小时。 ―弃去全部杂交液，以清洗缓冲液洗三次，每孔250ul每次至少30秒，小心弃去冲洗液。 ―每孔加入100ul抗-DIG
的离心管中，若有大量样本，建议使用无核酸酶包被的微孔板MTP。 —加入5μl扩增产物，15-25℃孵育10分钟。 —每个离心管内加入225μl杂交缓冲液，用振荡器完全混匀。 （如需要，杂交混合物量可以用于二次检测扩增产物。） —取出100μl混合物加入试剂盒中已包被的微孔板的每个孔中，并用盖子盖住小孔以防蒸发。 —将MTP微孔板置于37℃，300rpm的振荡器中孵育2小时。 —弃去全部杂交液，以清洗缓冲液洗三次，每孔250μl每次至少30秒，小心弃去冲洗液。 —每孔加入100μl抗
