- ¥3990
- 泽叶生物
- ZY-15-17710
- 中国/德国/美国
- 2025年11月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
10
- 英文名：
Foot-and-Mouth Disease Virus(FMDV)
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件：
负20度
Foot-and-Mouth Disease Virus(FMDV)
产品及特点：
口蹄疫病毒A亚型（Foot-and-Mouth Disease Virus(FMDV)）是由副黏病毒科麻疹病毒属的口蹄疫病毒A亚型（Foot-and-Mouth Disease Virus(FMDV)）引起的急性、烈性传染病。它是世界动物卫生组织（OIE）法定的 A 类传染病，我国将其定为Ⅰ类动物疫病。本产品就是以探针法荧光定量 RT-PCR 技术为基础开发的专门检测口蹄疫病毒A亚型的试剂盒。
| 产品名称 | 方法 | 规格 | 价格 |
| 口蹄疫病毒A亚型LAMP试剂盒 | LAMP | 50次 | 2490元 |
| 口蹄疫病毒A亚型PCR试剂盒 | PCR | 50次 | 1990元 |
| 口蹄疫病毒A亚型染料法荧光定量PCR试剂盒 | 染料法 | 50次 | 2990元 |
| 口蹄疫病毒A亚型探针法荧光定量PCR试剂盒 | 探针法 | 50次 | 3990元 |
1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据口蹄疫病毒A亚型高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。
规格及成分
| 成分 | 编号 | 十孔盒包装 |
| 探针法 qRT-PCR 缓冲液 | A | 500μL（黄盖） |
| 探针法 qRT-PCR 酶混合液 | B | 100μL（红盖） |
| 荧光 PCR 专用模板稀释液 | C | 1 mL（黄盖） |
| 口蹄疫病毒A亚型探针法 qRT-PCR引物混合液 | D | 100 μL（白盖） |
| 口蹄疫病毒A亚型 qRT-PCR 探针 | E | 50 μL（棕色管） |
| 口蹄疫病毒A亚型探针法 qRT-PCR阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) | F | 50 μL（黄盖） |
| 核酸释释剂（试用装） | G | 20 次（1mL，绿盖） |
| 使用手册 | H | 一份 |
自备试剂 ：样品 RNA。
使用方法
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
7. 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8. 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也以选购本公司的柱式病毒RNAout。本试剂盒免费赠送20次免RNA提取的核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为RT-PCR模板，省略了RNA提取步骤。
三、Probe qRT-PCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR 管，其中N+2个用于上步得到的 N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4 个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照（用第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
| 成分 | 样品管N+2个 | RT-PCR阴性对照管 | 标准曲线样品管 （2-7 管） |
| 探针法qPCR缓冲液 | 各 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 探针法 qPCR 酶混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 口蹄疫病毒A亚型qRT-PCR探针 | 各 1 μL | 1 μL | 各 1 μL |
| 口蹄疫病毒A亚型探针qRT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 待测样品 RNA 模板 | 各 5 μL | -- | -- |
| 超纯水 | -- | 5 μL | -- |
| 第 7 步所得标准曲线样品稀释液（2-7 号） | -- | -- | 各5 μL（2号样到2号管，3号样到3 号管…） |
- 盖上盖子后上机，按下面参数进行 qRT-PCR：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| qRT-PCR 反应（40 个循环） | 94℃ | 15 sec |
| 60℃ | 1 min（采集 FAM 通道的荧光信号） |
12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品RNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 35，则为阳性。
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文献和实验gene99 美国ＫＡＰＡ的 一步法的RT-PCR试剂盒说明书见附件！或者是染料法 探针法的荧光定量试剂盒。不知道您具体是需要什么 可以加我Ｑ：５１２５８０３３１ 把说明书及我这边做的对比实验的图发给你。 qisanni05 十分感谢！我的QQ号：546483973，能不能麻烦您把您的说明书及您做的对比试验结果发我QQ邮箱里，谢谢！ king19890405 我也想知道啊，感谢回答 本文由丁香
实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功
或者 Ct 值偏大的样本孔，到底是真的没有要检测的对象，还是扩增有问题，亦或是提取中的问题？为了发现这种假阴性的发生，合理的阳性对照可以监控实验的不同步骤： 扩增对照 Amplification Control 可使用含有扩增片段的质粒、假病毒或者基因组 DNA/cDNA 作为扩增阳性对照，监控荧光定量 PCR 的体系是否正常，包括酶、引物、探针等。如果检测中包含多个目标片段，可以将这些目标片段都克隆到同一个质粒中，方便制备和使用。当扩增对照没有扩增，或者 Ct 值大于预期，则说明定量 PCR
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