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- 文献和实验
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49
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50T
实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性定量方法，已得到全世界的公认，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
服务流程:
1.客户认真写好订单，提供待检基因相关信息；
2.签订技术服务合同，支付预付款（30-50%)；
3.设计合成定量PCR引物（或客户提供文献引物委托本公司合成）；
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反转录；
5.PCR预实验，主要检测引物的特异性和扩增效率；
6.正式定量实验：对所有样品上机检测；
7.实验结果和数据分析，形成报告。
荧光化学物质：
猫源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒检测实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下：
1. TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP），有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。
2. SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR仅与双链DNA进行结合，因此可以通过溶解曲线，确定PCR反应是否特异。
3. 分子信标：是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近，不会产生荧光。PCR产物生成后，退火过程中，分子信标中间部分与特定DNA序列配对，荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。
荧光定量PCR服务：
公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，主要定量PCR仪器。
1、荧光定量PCR服务要求：
（01）请您提供新鲜的且尽量多的材料；或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/样品）；或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/样品）。
（02）请提供已知的全长基因序列。
（03）请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA 来源等
2、荧光定量PCR操作程序
（01）引物（探针）设计与合成。
（02）提取DNA/RNA，样本逆转录成cDNA。
（03）进行Real Time PCR实验，进行实验结果分析。
（04）实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。
3、荧光定量PCR的收费标准：
我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。
返魂草(麻叶千里光) Soul grass(Maba Chisatohikaru) 5g
薤白队照药材Alliummacrostemonconolmedicine1g
Sitosteryl palMitate SITOSTERYL PALMITATE 2308-85-2
10-脱巴卡丁Ⅲ10-脱乙酰巴卡亭32981-86-510-Deacetylbaccatin III
远志山酮Ⅲ;polygalaxantho 162857-78-5 20mg 订购|咨询
奥美拉唑相关FG混合物标准品 25mg
水红木Viburnum cylindricum none 166322-14-1 C32H36O11 ≥95% 本妥英(P1290000
对照品醋酸甲羟孕酮0001-9503含量测定
Gatifloxacin加替沙星标准品300mg加替沙星标准品
双氢 71939-50-9 UV≥98%;20mg 订购|咨询
光甘草定 Glabridin 分 子 量：324.3700 CAS编号：59870-68-7 分子式：C20H20O4 别 名：甘草黄酮 【性状】无色片状结晶。熔点156～158℃， 3光甘草定是光果甘草中的主要黄酮类成分之一。
花旗松 Pseudotsuga Menziesii (+)-Taxifolin 花旗松素 480-18-2 C15H12O7 氮中气体标准物质06065
HPLC法含量测定维生素C100296-200303常温，避光1000mg
Voriconazole伏立康唑标准品137234-62-9 100mg
虫草Cordyceps sinensis N6-(2-xy7noxyetxyl)- Adenosine N6-(2-)腺苷 4338-48-1 C12H17N5O5 ≥98%
猫星形脑胶质细胞;PG-4(S+L-)
人脐静脉内皮细胞总RNAHUVEC NA
ACBD6 Others Human 人 ACBD6 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
Jecket细胞，淋巴瘤细胞 人肺腺癌细胞,SPC-A1细胞 EC109，人食管癌细胞
CL-0403NCI-H524(人非小细胞肺癌细胞)5×106cells/瓶×2
ACP5 Others Human 人 ACP5 / AP 人细胞裂解液 (阳性对照)
人胚肺成纤维细胞;MRC-5
FANCA Others Human 人 FANCA / FACA 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-7
K-562细胞，慢性髓原白血病细胞 小细胞肺癌细胞,NCI-H446细胞 人肾上腺皮质癌细胞;SW-13
KM小鼠网织细胞肉瘤瘤株;LⅡ
BST1 Others Mouse 小鼠 CD157 人细胞裂解液 (阳性对照)
猫源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒检测猫星形脑胶质细胞;PG-4(S+L-)
人脐静脉内皮细胞总RNAHUVEC NA
ACBD6 Others Human 人 ACBD6 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
Jecket细胞，淋巴瘤细胞 人肺腺癌细胞,SPC-A1细胞 EC109，人食管癌细胞
CL-0403NCI-H524(人非小细胞肺癌细胞)5×106cells/瓶×2
ACP5 Others Human 人 ACP5 / AP 人细胞裂解液 (阳性对照)
通用原则：
1， 先选择好探针，然后设计引物使其尽可能的靠近于探针。
2， 扩增子的长度应不超过400bp，理想的最好能在100－150bp内，扩增片断约短，有效的扩增反应就越容易获得。较短的扩增片断也容易保证分析的一致性
3， 保持GC含量在20％和80％之间，GC富含区容易产生非特异反应，从而会导致扩增效率的降低，及在SG分析中非特异信号。
4， 为了保证效率和重复性，应避免重复的核苷酸序列，尤其是G（不能有4个连续的G）
5， 将引物和探针互相进行配对检测，以避免二聚体和发卡结构的形成。
b），探针设计指导
1，在设计引物之前设计探针
2，探针的Tm值应在68－70℃之间，如果是目测探针，则要仔细审查GC富含区。
3，探针的5’端要避免有鸟氨酸，5’G会有淬灭作用，即使被切割下来这种淬灭作用也还会存在
4，选择C多于G的链作探针，G的含量多于C会降低反应效率，这时就应选择配对的另一条链作为探针。
6， 探针应尽可能的短，不要超过30个bp。
7， 检测探针的DNA折叠和二级结构。
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性定量方法，已得到全世界的公认，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
| 产品名称 | 猫源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒检测 |
| 英文名称 | |
| 货号 | BHR2325 |
1.客户认真写好订单，提供待检基因相关信息；
2.签订技术服务合同，支付预付款（30-50%)；
3.设计合成定量PCR引物（或客户提供文献引物委托本公司合成）；
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反转录；
5.PCR预实验，主要检测引物的特异性和扩增效率；
6.正式定量实验：对所有样品上机检测；
7.实验结果和数据分析，形成报告。
荧光化学物质：
猫源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒检测实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下：
1. TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP），有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。
2. SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR仅与双链DNA进行结合，因此可以通过溶解曲线，确定PCR反应是否特异。
3. 分子信标：是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近，不会产生荧光。PCR产物生成后，退火过程中，分子信标中间部分与特定DNA序列配对，荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。
荧光定量PCR服务：
公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，主要定量PCR仪器。
1、荧光定量PCR服务要求：
（01）请您提供新鲜的且尽量多的材料；或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/样品）；或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/样品）。
（02）请提供已知的全长基因序列。
（03）请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA 来源等
2、荧光定量PCR操作程序
（01）引物（探针）设计与合成。
（02）提取DNA/RNA，样本逆转录成cDNA。
（03）进行Real Time PCR实验，进行实验结果分析。
（04）实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。
3、荧光定量PCR的收费标准：
我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。
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对照品醋酸甲羟孕酮0001-9503含量测定
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双氢 71939-50-9 UV≥98%;20mg 订购|咨询
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花旗松 Pseudotsuga Menziesii (+)-Taxifolin 花旗松素 480-18-2 C15H12O7 氮中气体标准物质06065
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虫草Cordyceps sinensis N6-(2-xy7noxyetxyl)- Adenosine N6-(2-)腺苷 4338-48-1 C12H17N5O5 ≥98%
猫星形脑胶质细胞;PG-4(S+L-)
人脐静脉内皮细胞总RNAHUVEC NA
ACBD6 Others Human 人 ACBD6 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
Jecket细胞，淋巴瘤细胞 人肺腺癌细胞,SPC-A1细胞 EC109，人食管癌细胞
CL-0403NCI-H524(人非小细胞肺癌细胞)5×106cells/瓶×2
ACP5 Others Human 人 ACP5 / AP 人细胞裂解液 (阳性对照)
人胚肺成纤维细胞;MRC-5
FANCA Others Human 人 FANCA / FACA 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-7
K-562细胞，慢性髓原白血病细胞 小细胞肺癌细胞,NCI-H446细胞 人肾上腺皮质癌细胞;SW-13
KM小鼠网织细胞肉瘤瘤株;LⅡ
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人脐静脉内皮细胞总RNAHUVEC NA
ACBD6 Others Human 人 ACBD6 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
Jecket细胞，淋巴瘤细胞 人肺腺癌细胞,SPC-A1细胞 EC109，人食管癌细胞
CL-0403NCI-H524(人非小细胞肺癌细胞)5×106cells/瓶×2
ACP5 Others Human 人 ACP5 / AP 人细胞裂解液 (阳性对照)
通用原则：
1， 先选择好探针，然后设计引物使其尽可能的靠近于探针。
2， 扩增子的长度应不超过400bp，理想的最好能在100－150bp内，扩增片断约短，有效的扩增反应就越容易获得。较短的扩增片断也容易保证分析的一致性
3， 保持GC含量在20％和80％之间，GC富含区容易产生非特异反应，从而会导致扩增效率的降低，及在SG分析中非特异信号。
4， 为了保证效率和重复性，应避免重复的核苷酸序列，尤其是G（不能有4个连续的G）
5， 将引物和探针互相进行配对检测，以避免二聚体和发卡结构的形成。
b），探针设计指导
1，在设计引物之前设计探针
2，探针的Tm值应在68－70℃之间，如果是目测探针，则要仔细审查GC富含区。
3，探针的5’端要避免有鸟氨酸，5’G会有淬灭作用，即使被切割下来这种淬灭作用也还会存在
4，选择C多于G的链作探针，G的含量多于C会降低反应效率，这时就应选择配对的另一条链作为探针。
6， 探针应尽可能的短，不要超过30个bp。
7， 检测探针的DNA折叠和二级结构。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验相关实验
如果您的样本是组织，取样的过程非常重要。组织内部是有内源性 RNase 存在的，组织离体后内源性 RNase 则开始发挥作用，RNA 产生降解。所以离体的组织必须立马放在液氮中速冻，之后转移至 -80℃ 长期保存，且避免反复冻融。研磨组织的过程中需要保证在液氮环境中研磨。RNA 提取的过程中，保证样本的上样量不超过提取试剂盒说明书中规定的最大上样量，上样量过多，同样会造成 RNA 降解。 ②如果您的样本是细胞，则样本搜集过程要简单的多了，只要保证细胞状态良好（细胞状态差也容易造成提取的 RNA 降解
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标记（生物素、荧光、地高辛和Eu3+等）、引入与蛋白质结合的DNA序列、引入突变位点、插入与缺失突变序列和引入启动子序列等。 2 特定PCR的引物设计 在尽量遵循引物设计基本原则的同时，根据不同的实验目的，需要注意一些相应的事项，总结如下： 01 荧光定量PCR 荧光定量PCR有染料法和探针法两种。染料法只需要设计引物，而探针法除设计引物之外还得设计一条探针。 引物设计要尽量满足以下要求： 确保模板是cDNA
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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