线粒体膜/胞浆蛋白提取试剂盒现货供应

特别提示：包括线粒体膜/胞浆蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：线粒体膜/胞浆蛋白提取试剂盒
英文名称：Mitochondrial membrane / cytoplasmic protein extraction kit
产品货号：HR0157
产品规格：50T|100T

线粒体膜蛋白/胞浆蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取线粒体膜蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便。制备的线粒体蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
本试剂盒提取的蛋白不可用于2D电泳。如下游实验需要用于2D电泳，请使用其它货号的试剂盒。

储存条件：试剂AB 于2-8℃保存，长期存放于-20℃保存；试剂D 于2-8℃保存；试剂C和E室温保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品特点：
1．使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管● 涡旋振荡器 ●冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
● 最好使用 Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通1ml玻璃匀浆器匀浆也可。也可采用超声破碎的方法，建议功率30w，10s。采用普通匀浆器或超声破碎，建议镜检，保证细胞80%以上的破碎率。
● 每 200μl试剂C和试剂D 加入2μl蛋白酶抑制剂混合物混匀备用。

1．取2×107个细胞①，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2．用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3．加入 200μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
4．Dounce匀浆器匀浆30-40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
5．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6．在 4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
7．取步骤6的上清于另一干净离心管中，加入200μl试剂C混匀，在4℃，11000×g以上条件下离心5分钟，取上清，即得胞浆蛋白。
8.在步骤6的沉淀中加入200μl冷的试剂B，混匀。
9.在4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。弃上清。
10.在步骤 9 沉淀中加入加入200μl冷的试剂D，2μl蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒，置冰上15-20分钟，每隔5分钟涡旋振荡15秒。
11．37℃水浴10分钟。
12．37℃下②2000g离心5分钟，此时溶液分为两层(对着光线看)，下层约为20μl。
13.小心吸取上层丢弃或者小心吸出下层。
14．用 80-150μl 稀释液E 稀释所得的下层部分，即得线粒体膜蛋白。
15．将上述蛋白提取物定量③后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验④。
【注】：
①细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。由于膜蛋白含量较少，需要较多的细胞才能保证得率。
② 必需保证在37℃左右下离心，至少确保30℃以上。无可控温的离心机时，用常温的离心机在室温离心即可，适当缩短离心时间至2-3分钟。
③用BCA法进行蛋白定量。
④蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

我公司销售的线粒体膜/胞浆蛋白提取试剂盒现货供应，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。