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文献和实验关键词:大鼠 新生鼠 灌注取脑 后固定目的: 完整取出鼠脑及后期固定操作步骤流程:1)麻醉 2)开胸 3)心脏解剖 4)生理盐水冲水 5)4%多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片.1 多聚甲醛的配置:一般方法为:4%多聚甲醛PBS缓冲液配法:称取40g PFA溶于装有800ml PBS的玻璃容器(烧杯或烧瓶)中,持续加热磁力搅拌至60~65℃,使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH值至7.0,使呈清亮状(滴加),过滤后定容至1000ml,室温或4℃保存备用。2 实验准备:准备两个10ml
大鼠海马体神经元和活体大鼠脑注射 α 突触核蛋白后做的免疫细胞化学和免疫组化分析。 原代大鼠海马体神经元被 1 型突触核蛋白前体原纤维(SPR-322)4 µg/mL(D-F)处理后显示路易体内含物的形成,而当被 2 型突触核蛋白前体原纤维(SPR-317)4 µg/mL(A-C)处理时没有路易体内含物形成。组织:原代海马体神经元,物种:斯普拉-道来氏大鼠,固定:由 PFA 制作的 4% 甲醛。一抗:小鼠抗 pSer129 抗体, 稀释度 1:1,000,4 °C 下处理 24 小时;二抗
65℃,使成乳白色悬液。用1.0mmol/L 的NaOH调PH至7.0使呈清亮状(滴加),再加入约500ml 2×PBS,充分混匀(在冰浴或冷水浴中)。可再检测一下PH,过滤后定容至1000ml,室温或4℃(保存备用)。注意:1.配制时应在通风条件下操作,并避免接触皮肤及吸入(戴口罩及手套),因PFA有较强的毒性,对粘膜及皮肤有刺激作用。2.加热时,温度不可过高,常为60-65℃。否则PFA降解失效,配制好的PFA虽可有效一点时间,但过久的液体,固定效果下降,应用前新鲜配制。除了用DEPC水配制
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