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文献和实验相关专题 成功走出第一步:DNA提取 碱裂解法 大量提取质粒(500mL菌液) 1、取培养至对数生长后期(一般培养12~16小时)的含待提质粒的细菌 培养液于离心杯中,配平,4℃下4000rpm离心15min,弃上清,然后将离心管倒置于干净的约纸上使上清液全部流尽。 2、向盛有细菌 沉淀物的离心管中加入20mL冰冷的溶液Ⅰ,重悬沉淀(先加5mL溶液Ⅰ,用干净的玻璃棒搅拌均匀后,再加剩下的部分)。
ml 95%乙醇中贮于滴瓶中。【方法】一、呼吸速率的测定1、装配广口瓶测呼吸装置取500ml广口瓶1个,加一个三孔橡皮塞。一孔插入一装有碱石灰的干燥管,使吸收空气中的CO2,保证在测定呼吸时进入呼吸瓶的空气中无CO2;一孔插入温度计;另一孔直径约1cm,供滴定用。平时用1小橡皮塞塞紧。在瓶下面装一小钩,以便悬挂用尼龙窗纱制作的小筐,供装植物材料用。2、空白滴定 拔出滴定孔上的小橡皮塞,用碱滴定管向瓶内准确加入0.05mol/L Ba(OH)2溶液20ml,再把滴定孔塞紧。充分摇动广口瓶几min
加入适量红细胞裂解液裂解红细胞(可加入 500 μL 1× 红细胞裂解液重悬细胞,室温裂解 2 min 后,立马加入 10 mL PBS,300 g 离心 5 min 后弃上清)。 若提取的腹腔巨噬细胞需培养,请注意无菌操作。 收集腹水时,从小鼠左侧(肠道较多)注射 PBS,从右侧(器脏较大)抽腹腔灌洗液,注意不要扎到器脏。 小鼠腹腔灌洗液收集细胞比较脆弱,加细胞染色缓冲液有利于细胞的保存,但建议当天及时检测。 小鼠腹腔灌洗液中大多数为巨噬细胞,巨噬细胞检测需要封闭Fc受体,此时可使用小鼠 CD16/32纯
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