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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-80℃冰箱保存
- 英文名:
慢病毒浓缩试剂
- 库存:
174
- 供应商:
上海机纯实业有限公司
- 规格:
100ml/50ml
| 规格: | 100ml | 产品价格: | ¥1375.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50ml | 产品价格: | ¥825.0 |
产品描述
本慢病毒浓缩试剂为5×浓缩液,可以对慢病毒颗粒进行简单快速的浓缩。该试剂操作简单,仅需将5×浓缩液与慢病毒上清按比例混合并孵育一段时间,正常转速离心,即可得到浓缩的慢病毒颗粒,回收率高达90%以上,可提高100倍病毒滴度。
操作步骤
1. 收集细胞培养上清液,0.45μm滤膜过滤,去除细胞和碎片。
【注】:滤膜过滤需使用低蛋白吸附的纤维素醋酸酯或聚醚砜(PES)膜。切忌用硝酸纤维素膜(NC)。
2. 将慢病毒上清液与试剂盒中的浓缩液按照体积比4:1的体积混合(上清液4份,浓缩液1份),混匀后4℃静置,每隔30min混匀一次,混匀共进行3次。4℃孵育2h或过夜。
【注】:延长孵育时间可以提高回收率。慢病毒颗粒在4℃可以稳定保存数天。
3. 4℃,4000g离心30min。
4. 小心去除上清,不要剧烈晃动管子,一般可见白色沉淀(有时沉淀不可见)。
5. 用初始体积(原上清液体积)1/10 - 1/100的DMEM或PBS重悬病毒颗粒,小心吹打均匀,重悬沉淀物。
6. 重悬后的病毒以50µl/管分装,-80℃冰箱保存。
【注】:慢病毒冻存液避免反复冻融,否则会降低病毒滴度。
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- 内容
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文献和实验良好的的基因治疗效果,在美国已经开展了临床研究,效果非常理想,因此具有广阔的应用前景。 慢病毒转染优点:1.外源基因表达水平较高、表达稳定;2.转染效率高,可感染分裂和不分裂的细胞,几乎可以感染所有类型的细胞,特别适合质粒载体转染效率低的细胞;3.慢病毒基因容易操作,易于制备大量病毒且滴度高;4.病毒基因组可整合到细胞基因组,易于构建稳定细胞株。 慢病毒包装技术:慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。将外源基因克隆进入表达载体,同时与包装质粒(表达病毒包装所需辅助蛋白)一起转染
因撞击变松动,甚至损坏刻度调节旋钮。 3、吸液和放液: 吸液前枪头先在液体中预润洗 2-3 次确保移液的精度和准度; 吸液时,要确保移液器垂直且吸头浸没尽量浅一些,具体的浸入深度还应根据盛放液体的容器大小灵活掌握; 放液时,吸头尖端靠在容器内壁(特别是对于 20μL 以下的体积),移液器角度 20° - 45°。体积低于 10μL 直接放液到容器底部; 吸液和放液时务必要慢吸慢放,以免液体进入吸头过快而冲入到移液器内部腐蚀活塞。 4、移液方式: 正向移液: 推荐用于水溶液,如缓冲液、稀释酸
纯化慢病毒 以我们的 PEG 慢病毒纯化试剂为例进行慢病毒纯化浓缩。您也可以采用超速离心或者超滤法进行病毒浓缩。 所需试剂、耗材和仪器:冷冻离心机(50 ml 或 15 ml 容量);0.45μm 过滤器(推荐使用 Millipore 低蛋白结合滤膜 PES 或 PVDF);无菌 PBS 溶液。 操作步骤 1、收集病毒上清液,室温 500 g 离心 10 分钟,去除细胞碎片,将病毒液转移到一个新的离心管中。 2、用 0.45μm 过滤器过滤病毒
技术资料暂无技术资料 索取技术资料








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