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- JC-A78321
- 2026年01月21日
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- 保存条件：
2-8℃
- 英文名：
内毒素去除层析介质 Endotoxin Removal Beads
- 库存：
128
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 规格：
10mL
产品介绍
内毒素去除层析介质是一种用于去除生物源蛋白类产品（包括多肽、抗体、多糖等）中内毒素的产品。它是将修饰过的多粘菌素B连接至4%琼脂糖微球上，特异性去除内毒素，可将样品中内毒素降低至0.1EU/ml，样品回收率高。具体性能见表
| 性能 | 指标 |
| 基质 | 4%琼脂糖微球 |
| 配体 | 修饰过的多粘菌素B |
| 载量 | >2,000,000EU/ml 介质 |
| 粒径 (μm) | 45-165 |
| 大流速 | 0.1 MPa, 1 bar |
| pH 稳定范围 | 5-10 |
| 可耐受试剂 | 20%DMSO,20%乙醇,20%甘油；1M尿素,300mM咪唑；0.05% Tween 20, 10mM DTT等 |
| 储存缓冲液 | 20% 乙醇 |
| 储存温度 | 2-8℃ |
2. 内毒素去除流程
2.1 Buffer的准备
所有用水和及耗材均需无热源产品，防止在使用过程中引入内毒素。
平衡液: 20mM 磷酸盐，0.15M NaCl，pH7.4
再生液：1% Triton X-114
注: 结合液和洗脱液可根据样品性质进行改变，建议pH7-8，NaCl约0.15M-0.5M。
2.2 样品准备
样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
样品PH控制在pH7-8，因为内毒素结合至柱子上的佳pH为6-9。
样品控制适当的离子强度，减少非特异性吸附，如0.15-0.5M的NaCl。
2.4 样品纯化
将Endotoxin Removal Beads充分混匀，用无热源枪头吸取适量浆液（以1ml为例）加入至层析柱中，打开下出口去掉保护液。用3ml的再生液清洗，控制流速在0.25ml/min，或每分钟小于10滴。重复至少两次，确保柱子中无内毒素。
用3ml的平衡液平衡柱管内壁及层析介质，流干，流速约0.5ml/min，重复至少两次。
将样品加到平衡的Endotoxin Removal Beads中，调节流速在0.25ml/min，或每分钟小于10滴，当流出液流出约1ml时，开始收集流出液，流干后加入1ml平衡液继续收集。检测样品中内毒素含量及样品回收率。
如果样品中内毒素含量仍高于目标值，继续重复1-3。
3.问题及解决方案
| 问题 | 原因分析 | 推荐解决方案 |
| 内毒素去除效率低 | 样品pH值不在内毒素结合范围内 | 用0.1MNaOH或0.1M HCl调节pH7-8 |
| 样品与层析介质接触时间短 | 减少流速，增加样品接触时间 |
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文献和实验Methods for Chromatographic Removal of Endotoxin
Endotoxin removal is critical when producing therapeutic proteins in bacterial systems. This hydrophobic compound can be removed through chromatography or filtration, but presents unique challenges dependent upon protein composition
The E.Z.N.A.® Mag-Bind Dye terminator Removal Procedure
. 3. Incubate 10 minutes at room temperature. Place the microplate on a magnetic separation device designed for 96-well plate. Wait for 5 minute or until the solution is clear of beads. 4. Aspirate entire solution with multiple channel pipettor
Sepharose Fast Flow有较强结合。可在洗脱目标蛋白后用高盐缓冲液或NaOH去除。 利用CNBr或NHS Sepharose FF可偶联内毒素底物如LAL，PMB，自动成亲合层析介质结合内毒素。内毒素经常是多聚体，凝胶过滤层析可有效地将之去除。 2.去除——蛋白中的核酸 大量核酸增加样本黏度，令区带扩张，反压增加，降低分辨率和流速。药审和食检对核酸含量也有严格限制。 胞内表达蛋白的核酸问题尤其严重。核酸带阴电荷，在初步纯化时利用阳离子交换介质如STREAMLINESP，SP
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