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内毒素去除层析介质 Endot
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内毒素去除层析介质 Endotoxin Removal Beads
1年
上海晶抗生物工程有限公司
2-8℃
10mL
2. 内毒素去除流程2.1 Buffer的准备所有用水和及耗材均需无热源产品,防止在使用过程中引入内毒素。平衡液: 20mM 磷酸盐,0.15M NaCl,pH7.4再生液:1% Triton X-114注: 结合液和洗脱液可根据样品性质进行改变,建议pH7-8,NaCl约0.15M-0.5M。2.2 样品准备样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。样品PH控制在pH7-8,因为内毒素结合至柱子上的佳pH为6-9。样品控制适当的离子强度,减少非特异性吸附,如0.15-0.5M的NaCl。2.4 样品纯化将Endotoxin Removal Beads充分混匀,用无热源枪头吸取适量浆液(以1ml为例)加入至层析柱中,打开下出口去掉保护液。用3ml的再生液清洗,控制流速在0.25ml/min,或每分钟小于10滴。重复至少两次,确保柱子中无内毒素。用3ml的平衡液平衡柱管内壁及层析介质,流干,流速约0.5ml/min,重复至少两次。将样品加到平衡的Endotoxin Removal Beads中,调节流速在0.25ml/min,或每分钟小于10滴,当流出液流出约1ml时,开始收集流出液,流干后加入1ml平衡液继续收集。检测样品中内毒素含量及样品回收率。如果样品中内毒素含量仍高于目标值,继续重复1-3。
3.问题及解决方案
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