- ¥2398
- 泽叶生物
- ZY3121A
- 国产/进口
- 2025年07月11日
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大量
- 英文名：
No DMSO, no serum cell freeze.
- 保质期：
切勿冻存，有效期24个月
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件：
长时间储存于4℃
- 规格：
100ml
产品简介：
化学成分确定、不含动物源成份，也不含DMSO的冻存液。
可以广泛地运用于各类细胞特别是干细胞的冻存。
批次间十分稳定。
可以维持干细胞的多潜能性，不影响干细胞的增殖和分化能力。
细胞复苏率达90%以上，复苏效果优于含血清冻存液。
无需程序降温，可直接放置于负80℃冰箱冻存。
使用说明：
细胞消化和计数，用胰酶对待冻存的细胞进行消化，并对细胞进行计数。
1000rpm/min离心5分钟，去掉上清。
根据细胞计数的情况，加入适量的细胞无血清冻存液，使细胞密度在1×106/ml左右（或根据自己希望达到的细胞密度）。
轻轻地重悬细胞（务必重悬均匀）,将重悬的细胞按等份加入到灭菌的冻存管（需提前做好标记或者贴上标签）中，旋紧冻存管盖。
将冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒直接放入负80℃。
第二天将细胞从负80℃转移到液氮中。
注意事项：
最好用处于对数生长期的细胞进行冻存。
控制好胰酶的消化时间，切记消化过度，会影响细胞复苏效果。
重悬细胞的过程中，请务必要轻柔，以免损伤细胞，但同时也一定要充分重悬，这样细胞在复苏时才不会成团。
细胞操作请注意无菌。
运输与储存：冰袋运输，2～8℃保存，有效期24个月。
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- 内容
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文献和实验培养 24 - 48 h，细胞汇合度达到 80% - 95% 左右时收取上清，该上清液即可用于提取外泌体。 使用外泌体专用无血清培养基： 待细胞汇合度~50%时，移去原有完全培养基，添加新培养基进行培养，新培养基由 50% 外泌体专用无血清培养基 + 50% 完全培养基组成； 待细胞生长汇合度约为70-80%时，移去培养基； 使用1×PBS溶液将细胞润洗2-3次； 加入外泌体专用无血清培养基继续培养24 - 48 h，待细胞汇合度到 80% - 95% 时收取细胞培养上清液，该上清液即可用于外泌
一段时间的生长后收集细胞上清液。但是这两种方法都会存在一定的不足的，去外泌体血清难以做到 100% 的去除的，因此即使 1% 的血清外泌体残留也带来大量的异源外泌体，而外泌体专用无血清培养基，也不是适合所有的细胞，常见的肿瘤细胞培养通常都可以维持生长，而那些血清培养都困难的细胞就难以通用了，所以也需要一些预实验的摸索。 还有，那些 DMEM、1640、F12 的基础培养基是否可以替代血清或者外泌体专用无血清培养基呢？这样是不行的。因为细胞在这些基础培养基的环境下，是处于饥饿状态的，细胞会将培养
人外周血PBMC的制备流程 收集抗凝人外周血，用 1640 无血清培养基或 PBS 按照 1:1 的比例稀释，上下颠倒混匀或者用移液枪吹打混匀。 在 15 mL 离心管中，先加入 3 mL 充分混匀的 Ficoll 液（1.077 g/mL），再沿着管壁缓慢加入2 mL稀释后的血液，血液和 Ficoll 液分层明显为成功。 注：Ficoll 提前半小时从 4℃ 冰箱取出恢复到室温，温度过高会导致分离不明显，温度过低会导致密度过大，同样分离效果不好， 20~25℃ 最佳。。 将样本小心转移
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