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- 泽叶生物
- ZY1161N
- 国产/进口
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
酵母基因组DNA快速提取试剂盒
- 保质期：
-20℃保存2年
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
盒
酵母基因组DNA快速提取试剂盒
● 裂解液MS中含变性剂，请不要直接接触皮肤。
● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。
●本试剂盒需单独购买试剂：溶壁酶（N9031/N9032）。
产品说明
本产品用于酵母基因组DNA的小量提取。纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞释放基因组DNA，由硅胶膜柱可逆吸附基因组DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后，用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从1-5×107的酵母细胞中提取到3-35 μg 超纯基因组DNA（OD260/280 = 1.7-1.9）。
质量控制
提取的酵母基因组DNA质量通过琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切和序列测定分析。
保存条件
蛋白酶K室温运输，于-20℃保存，避免反复冻融。
其余试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下保存1年。
如果消化缓冲液DS和MS中有沉淀，可在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。
注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
● 溶壁酶（N9031/N9032）需要客户另行购买。
● 蛋白酶K请单独保存，不要与裂解液MS混合，如果可能，请在加入蛋白酶K混匀后，稍稍静置再加裂解液MS，可以得到更好的裂解效果。
● 应尽量使用新鲜的菌体，确保提取的基因组DNA不被降解。
● 在操作步骤4中，菌体应充分悬浮，不要残留菌块，避免影响溶菌效果。
● 在操作步骤5中，加入无水乙醇后，可能会出现絮状沉淀，应将离心管内的溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中，确保基因组DNA的得率。
● 所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心，速度为12,000 rpm（约13,400×g）。
操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
1 向每只1.5 ml离心管中加入酵母细胞液1-5 ml（最多不超过5×107个细胞），12,000 rpm离心1min，尽量去除上清。
● 菌液较多时，可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。
2 向菌体加入600 µl溶壁酶反应缓冲液，200 U溶壁酶，涡旋振匀，30℃消化30min。
● 可根据收集菌体量的不同、菌种的差异，溶壁酶比活的不同，相应调整溶壁酶的用量及消化时间。
3 5,000 rpm离心8-10min，去上清，收集沉淀。向收集到的菌体沉淀中加入200 μl消化缓冲液DS，振荡混匀。
● 如需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml，N9042）溶液，振荡混匀，室温放置5min。
4 加入20 μl蛋白酶K溶液，55℃水浴或金属浴30min。
5 加入220 μl裂解液MS，涡旋振荡混匀，直至形成均一的悬浮液，65℃温浴10min。溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠，室温放置5min使溶液冷却。
● 加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀，一般65℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明酵母细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不纯。
● 如菌体超过1.5 ml，可适当延长温浴时间。
6 加入220 μl无水乙醇，上下颠倒混匀，此时可能出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
● 若溶液体积大于纯化柱容积（700 μl），可分两次离心。
● 此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。
● 如柱子堵塞表明菌体过量。若发生此情况，减少菌量，或适当延长离心时间，直至洗脱液顺利离心至离心管为止。
7 加入500 μl去蛋白液PS，12,000 rpm离心1min，弃滤液。
● 此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质，以获得高质量基因组DNA。
8 加入500μl漂洗液PE，12,000 rpm离心1min，弃滤液。
● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。
9 加入500 μl漂洗液PE，12,000 rpm离心1min，弃滤液。12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。
● 此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR或酶切）。同时利于基因组DNA充分溶解。
10 将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中，向纯化柱中央处，悬空滴加30-100μl洗脱液TE，室温放置2min。
11 12,000 rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA，-20℃保存。
● 洗脱液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。
● 对洗脱液TE 65℃预热，会提高基因组DNA的产量。
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