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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
160
- 英文名:
H2O2 fluorescent probe
- 保质期:
1年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃避光干燥
- 规格:
1mg
特别提示:包括过氧化氢荧光探针在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:过氧化氢荧光探针
英文名称:H2O2 fluorescent probe
产品货号:KM0103
产品规格:1mg
本探针本身无荧光,可见光区域内无吸收峰。一旦接触H2O2,瞬间激发荧光增加并伴随可见波长吸收带的生成(Ex/Em=490/514nm)。因其二元的吸收/发射荧光反应,此探针具有较大的动力学范围。与相似的ROS比如O2-,NO,或OCl-相比,本探针对H2O2呈现出100倍以上的选择性。
注意事项:
1.本品的DMSO储存液需分装成单次用量后,-20oC避光保存,避免反复冻融。所有工作液现配现用。
2.整个操作过程中注意避光。
3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法:
1、储存液制备
将低温保存的产品从冰箱取出,置于室温回温至少20min。低速离心3-5min。之后往瓶内加入适量无水DMSO充分溶解配成2~5mM储存液(比如,1mg本探针(Mw:~600)加入333μlDMSO,充分溶解混匀后即得到5mM储存液)。按照单次用量分装冻存,避免反复冻融,至少3个月稳定。
2、工作液准备
正式实验前,或取粉末按照储存液制备用DMSO溶解,或于室温融化一管DMSO储存液。
2.1对于溶液H2O2测定,按照2~20μM工作液浓度制备2×工作液,用20mM Hepes缓冲液或其他缓冲液(pH 7.0)稀释储存液。工作液现配现用。建议使用5μM终浓度的探针,测定溶液体系中H2O2浓度。
2.2对于细胞H2O2测定,按照2~20μM工作液浓度制备1×工作液,用含20mM Hepes缓冲液的HBSS,pH 7.0或PBS稀释储存液。工作液现配现用。
3、上清液H2O2测定
以下为溶液H2O2测定的推荐步骤,仅作参考,请根据具体需求做优化调整。
3.1于96孔板,加50μl 2×探针工作液到每个孔(H2O2标准、空白对照、待测样本)内使总的测定体积为100μl/孔。
注意:对于384孔板,加25μl样品和25μl 2×探针工作液,使得测定体积为50μl/孔。
3.2室温避光孵育反应体系15~60min。
3.3荧光酶标板内监测用荧光增强,Ex/Em=490/525nm。
3.4空白孔(只含有反应缓冲液)的荧光用作对照,其他孔的荧光值需减掉空白对照孔荧光。
4、活细胞H2O2测定
本探针能主动扩散进入活细胞,且能反映胞内H2O2微摩尔浓度变化。以下是推荐的活细胞H2O2显微成像检测步骤,仅作参考,可根据具体需求优化调整。
4.1按照步骤2.2配制1×探针工作液。工作液现配现用。
4.2按照实验要求处理细胞。
4.3用1×探针工作液避光孵育细胞5~60min或适合自身需求的时间。用PBS清洗细胞2次。
4.3用荧光酶标板(底部读数模式)监测荧光增强,Ex/Em=490/525nm。或者用荧光显微镜的FITC通道成像检测荧光增强。
保存:-20oC避光干燥保存,至少1年有效。
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yy103084 我做的蓝藻,先用不同浓度梯度的H2O2处理藻细胞后,用活性氧荧光探针DCFH-DA染细胞,洗细胞后,上流式细胞仪检测,发现用H2O2处理的藻细胞内的活性氧反而还没有对照高,大家能帮忙分析下原因吗?非常感谢! xibeihu2008 我觉得,生物体内的活性氧的产生前体式H2O2,H2O2处理适当抑制了体内的产生!这是我的理解! petviolin H2O2作为信号,促使机体
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