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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
197
- 英文名:
DAB Kit(20×)
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
2~8℃
- 规格:
20ml|100ml
特别提示:包括DAB显色试剂盒(WB IHC)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:DAB显色试剂盒(WB IHC)
英文名称:DAB Kit(20×)
产品货号:WE0323
产品规格:20ml|100ml
DAB是HRP的常用底物,在辣根过氧化物酶的催化下,DAB会产生不溶于水和乙醇的棕色沉淀。该试剂盒适用于HRP系统的的免疫组化中的组织切片、细胞爬片以及Western Blot中PVDF膜、NC膜等的染色。辣根过氧化物酶可以催化底物DAB在目的蛋白所在的位置转变为褐色的化合物,可根据颜色反应来确定目的蛋白的位置及表达情况。
试剂盒组成:
| 组份 | 20ml | 100ml |
| 20×DAB-A | 1ml | 5ml |
| 1×DAB-B | 20ml | 100ml |
注意事项:
1、工作液现配现用,配制好的工作液2~8℃避光1小时内有效。
2、工作液用量必需充足,保证完全覆盖组织片或印迹膜。
3、显色后的组织切片或细胞爬片可用苏木*或甲基绿复染。
4、对于组织切片,以每张切片用50μl显色工作液计算,1ml 20×DAB为400张切片的用量,3ml为1200张切片的用量。
5、为获得最佳实验结果,请务必优化实验条件。
6、显色后若背景太深,可以考虑延长封闭时间,避免非特异性染色,或者缩短DAB的显色时间;显色后若显色太弱或没有显色,可以考虑增加一抗或二抗的浓度,或者适当延长显色时间。
7、DAB为可疑致癌物,使用时请采取必要的防护措施。
8、本产品仅用于科研,不能用于人体反应或人体治疗。
操作步骤:
1、DAB显色工作液配制:根据需要量,将20×DAB-A和1×DAB-B以1:19的体积比混匀后即为DAB显色工作液。也可选择每毫升DAB-B中滴加1滴(约50μl)DAB-A,混匀即可。
2、显色:
1)印迹膜显色:将配制好的工作液滴加在印迹膜上(或将印迹膜倾入到DAB工作液中)即可显色。显色时间一般为1-5分钟。显色完毕后,将膜浸入水中,终止反应。
2)组织切片或细胞爬片显色:加适量的DAB显色工作液于需要显色的组织切片或细胞爬片上即可显色,显色时间一般为1-5分钟。显微镜下观察控制显色时间,当达到最佳显色效果后,自来水冲洗终止显色。显色后的切片经复染、脱水透明,封片后可长期保存。
储存条件:2~8℃
我公司销售的DAB显色试剂盒(WB IHC)现货供应,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验-1:5000的稀释度,用1%BSA-PBS(含0.05%TWEEN20)稀释 ④ 显色底物缓冲液 A.HRP标记二抗底物缓冲液 DAB KIT(KPL LOT NO YM107 CAT:54-10-00), Tris Buffer 3滴,DAB Substrate 3滴,Peroxide solution 2滴于5ml蒸馏水中,避光,混匀 B.AKP标记二抗底物缓冲液 AKP缓冲液: 0.1mol/L Tris-HCL(PH9.5), 0.1mol/L NaCL
01 HRP 生色底物 HRP因比活高、分子量小、特异性强、稳定性好和底物范围广等优点成为最常见的酶促发光或显色的交联酶。HRP底物主要包括化学发光底物和生色底物。底物的选择需优先考虑灵敏度、背景及使用的方便性和稳定性,生色底物主要包括DAB、4-CN、CN/DAB、AEC和TMB等,其显色主要是在HRP和H2O2存在下失去电子并呈现颜色变化积累的WB检测结果。 底物 DAB 4-CN AEC TMB
显影--淬灭的祸因当抗体孵育、TBST漂洗结束后,进入ECL显影步骤。当然,目前国内一些实验室已经换用仪器扫描荧光信号,而我们更是二抗直接连荧光蛋白连ECL和常规的底片显影都省略了,因此以下所讨论的某些细节问题可能不再出现。首先坛子上还有少数实验室处于DAB显色时代,奉劝一句,都走到最后一步了就不要节省了;DAB显色的灵敏性是远远不够的。目前较为流行的仍是化学发光法,下面简述一下其原理:交联在二抗上的HRP酶能够特异水解过氧化物产生化学能;ECL中主要包含两种成分,催化剂和中间递质(白色瓶子
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