鲍疱疹样病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

荧光定量PCR试剂盒技术：
本实用新型专利技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型专利技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。

产品名称：鲍疱疹样病毒探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Abalone Herpes-like Virus(AbHV)
编号：EY00P02
分类：探针荧光定量PCR试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
主要特征：
准确性高：创新的ASL Probe修饰探针和高特异性SNP Ligase有力的保证了分型的准确率。
重复性好：该分型体系经过反复验证和优化，获得的数据重复性极好。
低成本：无需合成大量昂贵的双标探针。
无需高质量的基因组DNA：粗提物即可进行实验操作。便于快速大量制备基因组DNA。通常386个全血DNA可在30min内制备完毕。
操作简单：简单易懂、结果清晰的分型判断标准，在PCR仪充足的情况下，单人可轻松完成超过3860个SNP数据分析。
应用：
分子标记辅助育种
遗传疾病诊断
致病候选基因研究
药物筛选研究
群体遗传研究

产品特点
1. 使用化学修饰的热启动聚合酶，反应特异性高，*程度地避免了非特异扩增；
2. 反应缓冲液经充分优化，反应灵敏快速，40个循环只需20多分钟；
3. 抗干扰能力强，反应重复性高，适合对土壤、粪便、肿瘤和血液来源的复杂样本中的靶基因进行检测分析。
在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
 特异性荧光标记：
 TaqMan法
 TaqMan探针的特性：
（1）5′端标记有报告基团（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端标记有荧光淬灭基团 （Quencher, Q）
（3）探针完整，R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ，无荧光， R与Q分开，发荧光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探针
相对定量通过内标定量：
内标（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在细胞中的表达量或在基因组中的拷贝数恒定，受环境因素影响小，内标定量结果代表了样本中所含细胞或基因组数量。
相对定量分析方法  ：
 2-ΔΔCt
前提：目标序列和内参序列的扩增效率接近100％且偏差在5％以内
  1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值：
    ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test） 
    ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator） 
  2、用校准样本的ΔCT值归一试验样本的ΔCT值：
         ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
  3、计算表达水平比率：
                    2 –ΔΔCT=表达量的比值

几种传统荧光定量PCR方法简介：
　　1）鲍疱疹样病毒探针法荧光定量PCR试剂盒内参照法：
　　在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
　　2）竞争法：
　　选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
　　3）PCR－ELISA法：
　　利用生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
以下是公司正在促销打折产品：
染色体
细胞名称 人二倍体细胞；HEL
形态特性 成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 HEL是一株人二倍体细胞系，具有典型的成纤维细胞形态，染色体2n＝46。可用于作多种病毒的宿主，抗衰老药物试验等。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle＇s Balanced Salts) 10%FBS
传代方法 1:3传代,2-3天传一代
传代情况 C19
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR STR鉴定
同工酶
染色体
细胞名称 人淋巴细胞；1301
形态特性 淋巴母细胞样
生长特性 悬浮生长
特征特性
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法
传代情况 Unknown
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
细胞名称 人胚胎肺成纤维细胞；WI-38
形态特性 成纤维细胞
生长特性 贴壁生长
特征特性 WI-38人二倍体细胞系来自妊娠3个月的正常胚胎肺组织。 该细胞系是首株用于人类疫苗制备的人二倍体细胞系。 培液中添加TNF alpha可以促进细胞生长。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle＇s Balanced Salts) 优质胎牛血清，10%
传代方法 消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况 P(15+5)
冻存条件 完全培养基+8%DMSO
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
细胞名称 人正常前列腺上皮细胞；RWPE-1
形态特性 上皮细胞
生长特性 贴壁生长
特征特性 肿瘤抑制基因： p53 + [PubMed: 9214605] pRB + [PubMed: 9214605] 一位正常男性前列腺组织切片的周围区域的上皮细胞用单拷贝的人瘤病毒的18(HPV-18)进行转化，建立了RWPE-1 (ATCC CRL-11609) 细胞株 [PubMed: 9214605]. 在三维Matrigel培养时，在雄激素作用下，RWPE-1细胞形成腺胞并向培养基中分泌PSA。[PubMed: 11170142]. 当与Matrigel或基质细胞混合注射雄性裸鼠时，RWPE
培养条件 这株细胞的基本培养基作为Invitrogen (GIBCO)提供的kit的部分： 角化细胞无血清培养基K-SFM，kit目录号17005-042。随kit提供这株细胞生长所需的两种添加剂（牛垂体提取物BPE及人重组表皮生长因子EGF）。 配制完全生长培养基，需添加以下成分： 0.05 mg/ml BPE – 随K-SFM提供 5 ng/ml EGF -随K-SFM提供。
传代方法 消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况 P(52+5)
冻存条件 完全培养基+8%DMSO
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
细胞名称 人胚胎，皮肤，肌肉；M-22
形态特性 成纤维细胞样
吉氏巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒    Babesia gibsoni
大巴贝虫探针法荧光定量PCR试剂盒    Babesia major
莫氏巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒    Babesia motasi
羊巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒    Babesia ovis
柏氏巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒    Babesia perroncitoi
巴贝斯属虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒    Babesia spp.
炭疽芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Bacillus anthracis
萎缩芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Bacillus atrophaeus
33蜡状芽孢杆菌33探针法荧光定量PCR试剂盒    Bacillus cereus E33 E33
蜡样芽胞杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Bacillus cereus
幼虫芽胞杆菌（美洲蜂幼虫腐臭病）探针法荧光定量PCR试剂盒    Bacillus larvae
地衣形芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Bacillus licheniformis
芽孢杆菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒    Bacillus spp.
枯草芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Bacillus subtilis
脆弱拟杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Bacteroides fragilis
拟杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒    Bacteroides spp.
中肠腺坏死杆状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒    Baculoviral Midgut Gland Necrosis Type Virus (BMNV)
对虾杆状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒    Baculovirus Penaei(BP)
巴氏阿米巴原虫探针法荧光定量PCR试剂盒    Balamuthia mandrillaris
杆状巴尔通体探针法荧光定量PCR试剂盒    Bartonella bacilliformis
伊丽莎白巴尔通体探针法荧光定量PCR试剂盒    Bartonella elizabethae
汉氏巴尔通体（汉塞巴尔通体、猫抓病、猫抓热）探针法荧光定量PCR试剂盒    Bartonella henselae（、、）
五日热巴尔通体探针法荧光定量PCR试剂盒    Bartonella quintana
巴尔通体通用探针法荧光定量PCR试剂盒    Bartonella spp.
文氏巴尔通体探针法荧光定量PCR试剂盒    Bartonella vinsonii
箭毒蛙壶菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Batrachochytrium dendrobatidis
鹦鹉喙羽病病毒探针法荧光定量PCR试剂盒    Beak and Feather Disease Virus（BFDV）
球孢白僵菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Beauveria bassiana
贝氏贝诺孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒    Besnoitia besnoiti
海藻百伯史坦菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Bibersteinia trehalosi
两岐双岐杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Bifidobacterium bifidum
长双歧杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Bifidobacterium longum
双歧杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒    Bifidobacterium spp.
病毒探针法荧光定量PCR试剂盒    BK(BK Virus、BKV)
芽囊原虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒    Blastocystis spp.
皮炎芽生菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Blastomyces dermatitidis
饰纹汀蛙虹彩病毒探针法荧光定量PCR试剂盒    Boheliridovirus(BIV)
杀蛎包拉米虫探针法荧光定量PCR试剂盒    Bonamia exitiosus
牡蛎包拉米虫探针法荧光定量PCR试剂盒    Bonamia ostreae
包纳米虫属通用探针法荧光定量PCR试剂盒    Bonamia spp.
鲍疱疹样病毒探针法荧光定量PCR试剂盒禽波氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Bordetella avium 
支气管败血波氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Bordetella bronchiseptica
副百日咳波氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Bordetella parapertussis
百日咳波氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒    Bordetella pertussis
内标对荧光定量PCR的影响：
1．实时荧光定量PCR无需内标实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
　　1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
　　2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
2．内标对实时荧光定量PCR的影响若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则PCR反应变为双重PCR，双重PCR反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为显著。但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内标。也正是这个原因，传统定量方法虽然加入内标，但仍然只是一种半定量的方法。