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- caiyoubio
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- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
110
- 规格：
500ml
检测指标更直接
DMEM(L) (含双抗)与传统的检测线粒体膜电位方法相比，能够更直接地检测线粒体通透性转换孔开放程度的变化；
荧光探针毒性更低
由于C2012 Calcein AM (钙黄绿素AM)的毒性特别低，并且不会抑制细胞的增殖、趋化性等绝大部分功能，所以与其它同类产品如CFDA SE等相比是更适合染活细胞的荧光探针；
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兼容性好
后续还可进行其他非绿色荧光染色，例如采用Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒(C1065)或细胞凋亡与坏死检测试剂盒(C1056)检测细胞凋亡、Mito-Tracker Red CMXRos (C1049)检测线粒体活力、Hoechst 33342活细胞染色液(C1027/C1028/C1029)染色细胞核等。
图1. 线粒体通透性转换孔(MPTP)检测试剂盒原理图。荧光探针钙黄绿素乙酰甲酯(Calcein AM)通过被动运输进入活细胞后被酯酶(Esterase)催化生成钙黄绿素(Calcein)，整个细胞都呈现很强的绿色荧光；含Co2+)处理后，呈现绿色荧光的Calcein结合钴离子生成没有荧光的Calcein-2Co，但正常情况下线粒体的MPTP没有打开，从而钴离子不能进入线粒体，因此此时仅线粒体中呈现绿色荧光；如果采用阳性对照钙离子载体(Ionomycin)处理后，钙离子大量进入细胞内和线粒体基质，导致MPTP打开，使部分Calcein从线粒体内释放，和胞浆中的钴离子结合而失去荧光。同时钴离子进入线粒体内从而使线粒体内呈现绿色荧光的Calcein也生成了没有荧光的Calcein-2Co。如果有样品可以诱导MPTP的部分或全部打开，就会导致线粒体中的绿色荧光减弱甚至消失。这样就可以根据线粒体中Calcein绿色荧光的强弱来判断线粒体MPTP开放的程度，绿色荧光越强，开放程度越低，绿色荧光越弱开放程度越高。
图2. 使用线粒体通透性转换孔(MPTP)检测试剂盒检测MPTP开放的效果图。Calcein AM (1X)与L-929细胞进行孵育，细胞质包括线粒体发出强绿色荧光(A)；细胞进一步与CoCl2 (1X)孵育以后，细胞质内Calcein的绿色荧光被CoCl2淬灭，仅留下线粒体内的绿色荧光(B)；使用Ionomycin (1X)处理细胞，诱导细胞外的Ca2+大量进入细胞内，过多的Ca2+进入线粒体基质，导致MPTP的开放，使部分Calcein从线粒体内释放，同时使钴离子进入线粒体内并导致Calcein的绿色荧光淬灭(C)；使用解耦联剂CCCP和FCCP (5μM)处理细胞，虽然线粒体膜电位丢失，但短时间内不会直接引起MPTP的开放，因此线粒体内绿色荧光强度无明显变化(D、E)。
DMEM(L) (含双抗)注意事项：
荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
Calcein AM在潮湿环境中容易分解，并避免反复冻融，收到产品后建议分装并-20℃密封保存。
由于Calcein AM在PBS等水溶液中不稳定，配制成工作液后需尽快使用。
培养液中的血清和酚红对Calcein AM的染色有一定的影响，建议在加入Calcein AM工作液前充分洗涤细胞。
Calcein AM标记的细胞，荧光均匀，而且对短期细胞迁移示踪效果非常好，但荧光的持续时间与细胞类型、培养条件等因素相关，一般在几小时之内，而且有时也会被某些类型细胞迅速外排。如果需要长时间标记细胞，请使用CFDA SE (C1031)等荧光探针。
DMEM(L) (含双抗)仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。8-Azaguanine 8－氮杂鸟嘌呤DMEM(L) (含双抗)
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文献和实验4 加水定容到终体积。 5 必要时用1 mol/L 盐酸和1 mol/L 氢氧化钠调节pH。 6 用无菌0.22um滤膜过滤除菌，分装于无菌血清瓶中，4℃冰箱保存。 配制好的培养液用前加入100U/mL青霉素和100U/mL链霉素，并根据需要加入血清(5%-20%)。 DMEM培养基应用广泛。基于DMEM培养基中氨基酸、微生物含量丰富，并具有糖酵解中的丙酮酸和微量Fe离子，因此在细胞培养 、疫苗生产等方面的应用最为常见。
. Cohen, “The Role of Protein Phosphorylation in Neural and Hormonal Control of Cellular Activity”, Nature, 1982, 296 (5858): 613-620. 2. From: http://en.wikipedia.org/wiki/Protein_kinase. 3. L. A. Pinna, A. Donella-Deana, “Phosphorylated Synthetic
这里是一份GIBCO的低糖DMEM粉剂配制说明（普通高糖的DMEM培养基配法是一样的）： TO PREPARE 1*LIQUID 1. Measrue out 5% less distilled water than desired total volume of medium using a mixing container that is as close to the final
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