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- caiyoubio
- 356230
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
110
- 规格：
5ml
检测指标更直接
Matrigel（基底胶）GFR,低生长因子与传统的检测线粒体膜电位方法相比，能够更直接地检测线粒体通透性转换孔开放程度的变化；
荧光探针毒性更低
由于C2012 Calcein AM (钙黄绿素AM)的毒性特别低，并且不会抑制细胞的增殖、趋化性等绝大部分功能，所以与其它同类产品如CFDA SE等相比是更适合染活细胞的荧光探针；
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兼容性好
后续还可进行其他非绿色荧光染色，例如采用Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒(C1065)或细胞凋亡与坏死检测试剂盒(C1056)检测细胞凋亡、Mito-Tracker Red CMXRos (C1049)检测线粒体活力、Hoechst 33342活细胞染色液(C1027/C1028/C1029)染色细胞核等。
图1. 线粒体通透性转换孔(MPTP)检测试剂盒原理图。荧光探针钙黄绿素乙酰甲酯(Calcein AM)通过被动运输进入活细胞后被酯酶(Esterase)催化生成钙黄绿素(Calcein)，整个细胞都呈现很强的绿色荧光；含Co2+)处理后，呈现绿色荧光的Calcein结合钴离子生成没有荧光的Calcein-2Co，但正常情况下线粒体的MPTP没有打开，从而钴离子不能进入线粒体，因此此时仅线粒体中呈现绿色荧光；如果采用阳性对照钙离子载体(Ionomycin)处理后，钙离子大量进入细胞内和线粒体基质，导致MPTP打开，使部分Calcein从线粒体内释放，和胞浆中的钴离子结合而失去荧光。同时钴离子进入线粒体内从而使线粒体内呈现绿色荧光的Calcein也生成了没有荧光的Calcein-2Co。如果有样品可以诱导MPTP的部分或全部打开，就会导致线粒体中的绿色荧光减弱甚至消失。这样就可以根据线粒体中Calcein绿色荧光的强弱来判断线粒体MPTP开放的程度，绿色荧光越强，开放程度越低，绿色荧光越弱开放程度越高。
图2. 使用线粒体通透性转换孔(MPTP)检测试剂盒检测MPTP开放的效果图。Calcein AM (1X)与L-929细胞进行孵育，细胞质包括线粒体发出强绿色荧光(A)；细胞进一步与CoCl2 (1X)孵育以后，细胞质内Calcein的绿色荧光被CoCl2淬灭，仅留下线粒体内的绿色荧光(B)；使用Ionomycin (1X)处理细胞，诱导细胞外的Ca2+大量进入细胞内，过多的Ca2+进入线粒体基质，导致MPTP的开放，使部分Calcein从线粒体内释放，同时使钴离子进入线粒体内并导致Calcein的绿色荧光淬灭(C)；使用解耦联剂CCCP和FCCP (5μM)处理细胞，虽然线粒体膜电位丢失，但短时间内不会直接引起MPTP的开放，因此线粒体内绿色荧光强度无明显变化(D、E)。
Matrigel（基底胶）GFR,低生长因子注意事项：
荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
Calcein AM在潮湿环境中容易分解，并避免反复冻融，收到产品后建议分装并-20℃密封保存。
由于Calcein AM在PBS等水溶液中不稳定，配制成工作液后需尽快使用。
培养液中的血清和酚红对Calcein AM的染色有一定的影响，建议在加入Calcein AM工作液前充分洗涤细胞。
Calcein AM标记的细胞，荧光均匀，而且对短期细胞迁移示踪效果非常好，但荧光的持续时间与细胞类型、培养条件等因素相关，一般在几小时之内，而且有时也会被某些类型细胞迅速外排。如果需要长时间标记细胞，请使用CFDA SE (C1031)等荧光探针。
Matrigel（基底胶）GFR,低生长因子仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。8-Azaguanine 8－氮杂鸟嘌呤Matrigel（基底胶）GFR,低生长因子
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文献和实验境由细胞外基质(ECM)蛋白、周围细胞、细胞因子、生长因子、激素和其他生物活性分子组成，具有张力和硬度等方面的纳米/微量级机械性能。传统的3D细胞培养依靠成分不明确的Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)肉瘤来源的基底膜(BME)提取物，比如Matrigel®基质(E1270)包裹细胞。这类水凝胶是由浓度较高的生长因子（TGFβ、EGF、IGF等）和ECM蛋白（层粘连蛋白、胶原蛋白、巢蛋白等）组成的异质性混合物，而且这些肿瘤来源的水凝胶不能完全再现天然组织微环境，可能会导致不一致且具有
人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南
台中，使用体积设置为 10 µL的无菌 20 µL 移液器吸头从 60 mm 培养皿中6个较完整的类器官，并将其转移到 96 孔 U 型底板的 1 个孔中。 6. 将 96 孔板从解剖台转移到组织培养超净台中。 注意：为避免 ECM基质胶过早凝胶化，我们建议一次制备不超过 3 个细胞培养小室。 1. 将 60 µL 冷的 100%的减生长因子(GFR) ECM基质胶加入步骤 5 中的 96 孔板的每个孔中。通过移液器轻轻混合几次，避免产生任何气泡。 总体积 = 每孔130 µL。
便捷、成本也低，自此开启了类器官疾病研究的浪潮。2015 年，Hans Clevers 团队再一次发表了开创性研究：基于癌症患者肿瘤衍生出的 3D 类器官，构建首个结直肠癌类器官「生物银行」。类器官可以复制原发肿瘤的突变信息，适用于高通量的药物筛选，检测与药物敏感性相关的一些遗传改变，为个体化治疗癌症提供了新思路[1]。结直肠癌类器官「生物银行」构建图示。图片来源：Cell■ 药物筛选通常，动物（例如小鼠）是临床前研究的首选模型，但是构建合适的动物模型需要至少数月的时间。而且很多药物在临床前研究中（包括
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