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传统的2D-LC中所使用的是离子交换(IEX)法,继之以反相(RP)法。而所有的IEX方法均需使用含盐缓冲液,易产生离子化背景,如其进入质谱仪(MS),还会对仪器造成问题。由于IEX分离技术仅仅取决于多肽所携电荷,因此在第一维的IEX分离中常表现为较差的分离度,多肽的多个组分混杂,所得数据难于用于解析。
改进后的2D方法第一维为pH 10条件下的反相分离,随后的第二维则是pH 2条件下的反相分离,最终分离效果远优于常规IEX法。
性能特点:
· 为多肽大范围离子结构和疏水结构的研究,提供二维水平上均佳的分离
· 更有利于蛋白质鉴别、定量分析和序列覆盖度测定
· 分离度改善、有方法建立向导、数据算法增强
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文献和实验ELISA检测系统可谓是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在新老手操作过程中总是会出现或大或小的问题,本人在刚开始做ELISA时就面临很多困难,虽然有师兄师姐铺路,但还是常常做得一塌糊涂,比如说花板,假阳性,全显色,全部显色,显色比空白还低......自己也为此苦恼过很长一段时间,随着自己技术水平得提高,或多或少地也掌握了ELISA体系的脾气,也是熟能生巧吧,现在做方阵,做ELISA已是轻车熟路了,以前检测一种抗体用整整一下午还算得晕晕的,现在给我十个八个的从包被到显色
上就是使用液相色谱管路(PEEK材料)充当进样针以减少死体积,而"外针"是一小段硬管,用来扎破样品瓶盖。 压力辅助进样在如此小的仪器的系统体积下保证可靠、重现的进样是非常重要的措施。为了降低交叉污染,采用了一强、一弱的双溶剂的进样针清洗步骤,这两个洗针溶剂也采取了脱气措施。 高速检测器 然而,在新的色谱柱技术支持下的高压、高速UPLC对ACQUITY UPLCTM结果的检测提出了挑战。首先是速度问题,在短时间内出现如此多的色谱峰需要更快的数据采集速率相适应,至少要在10Hz
Quantification of Tricyclic Antidepressants Using UPLC-MS/MS
, and norclomipramine) in serum or plasma, using ultra pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS). The sample preparation employs a rapid protein precipitation with 50:50 MeOH:acetonitrile, high speed centrifugation, and injection of 5 μL
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