神经逆行示踪金标准-荧光金（Fluoro-Gold）

神经逆行示踪金标准-荧光金（Fluoro-Gold）

简介：

Fluorochrome 1985年创立于美国，长期致力于荧光染料的研发工作，其特色产品荧光金（Fluoro-Gold）自1985年问世以来已在全球范围获得广泛应用，拥有大量文献引用。荧光金（Fluoro-Gold）是目前全球应用广泛、效果较好的神经元逆行追踪剂；荧光金（Fluoro-Gold）的使用方法与其他荧光示踪剂基本相同，主要区别在于其在注射后存活时间、浓度范围、组织处理以及与其他组织化学技术的兼容性方面具有更强的灵活性。

保存和效期：

荧光金干粉需要4℃避光保存。按要求保存，效期可超过1年。溶解后的荧光金也应4℃避光保存，溶解后效期至少6个月。

溶剂选择：

荧光金可溶于蒸馏水或0.9%生理盐水，也可配成0.2M中性磷酸盐缓冲液的悬浮液使用。

工作浓度：

荧光金的有效使用浓度为1%-10%，建议初始采用4%浓度。若注射部位出现组织坏死或标记信号过强，可将浓度降至2%。需精确计量时，请参考荧光金分子量532.6Da。

给药方式：

A. 压力注射：最常用方法，注射体积0.05-1ul，典型用量0.1-0.2ul。

B. 离子电渗：采用4-10秒脉冲式离子电渗（5至10微安/10分钟）可形成精确的微小注射位点。

C. 晶体植入：可通过微玻管尖端直接植入晶体形态的示踪剂。

术后存活时间

逆行标记效果在术后2天至2个月内均有效，典型存活期为3-5天。较长存活期有助于染料充分填充远端神经突触，且不会出现细胞染料扩散现象。

固定处理

可采用任意固定剂或不固定：常用4%甲醛磷酸盐中性缓冲液。含高浓度重金属（如锇、汞）的固定剂会淬灭荧光，而高浓度Glutaraldehyde（＞1%）可能增加背景荧光。

组织化学处理

含荧光金的组织可适用于几乎所有常规组织学技术：包括未固定组织的冰冻切片（10um）、固定组织的冷冻切片（20um）、塑料包埋薄切片（0.2-4um）及石蜡切片（3-10um）。常用的是固定组织的冷冻切片。

组合标记方法

切片可进一步进行第二种标记物的处理，包括：放射自显影术、HRP组织化学法、免疫细胞化学法、第二种荧光示踪剂、荧光复染等技术。

贴片、透明与封片

切片通常贴附于明胶包被的载玻片，空气干燥后浸入二甲苯透明，最后采用非荧光DPX塑料封片剂封片。除非与第二种示踪剂存在兼容性问题，否则可通过梯度酒精进行脱水处理。若需将金荧光与荧光免疫细胞化学技术联用，切片应空气干燥后直接使用中性缓冲甘油（1:2比例）封片。

荧光金检测

荧光金可通过荧光显微镜配合宽波段紫外线激发滤光片进行观测。当组织经中性pH缓冲液处理时会发射金色荧光，而经酸性缓冲液（如pH 3.3）处理时则呈现蓝色荧光。可采用数码摄影成像。多数曝光时间介于10-60秒之间，具体取决于物镜放大倍数和标记强度，30秒曝光为常用参数。可通过多重曝光技术同时观测荧光金与其他示踪剂：结合紫外光源与明场照明可同步定位荧光金与HRP标记物或放射自显影的银颗粒；采用蓝光激发可同步显示FITC的绿色荧光；使用绿光激发则可同步观察碘化丙啶或溴化乙锭（荧光复染剂）的红色荧光。

染色结果（示例）

产品信息：

品牌	产品名称	规格
Fluorochrome	Fluoro-Gold 荧光金	20mg/50mg

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