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免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠IgG)

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  • 上海一研
  • EY-24703
  • 进口、国产
  • 2025年07月08日
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    • 英文名

      SP Kit(Mouse)

    • 保质期

      详见说明书

    • 供应商

      上海一研

    • 保存条件

      低温

    • 规格

      3ml|6ml|18ml|110ml

    中文名称:免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠IgG)
    英文名称:SP Kit(Mouse)

    产品规格:3ml|6ml|18ml|110ml
    发货周期:1~3天
    本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG的免疫组化实验DAB显色。SP法检测试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。
    保存:如果长时间不使用,请将所有试剂存放于-20℃,如经常使用,可将封闭液,3%H2O2和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。
    操作步骤(以石蜡切片为例):
    1.切片常规脱蜡至水(三次二甲苯,三次乙醇)。
    2.3%H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
    3.可选步聚:
      a、热修复抗原,将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5~10分钟后,反复1~2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1~2次。
      b、酶消化,滴加消化液,37℃10分钟,PBS(pH7.2-7.4)洗涤2~3次。
      c、跳过此步,直接进入下一步。
    4.滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,免洗。
    5.用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
    6.根据用量,用稀释液将生物素-羊抗小鼠IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl生物素-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素-羊抗小鼠IgG工作液,20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。
    7.根据使用量,用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl链酶亲和素-POD浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液,20-37℃,30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。
    8.DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1mlPBS加入50μl 20×DAB显色液A,加入50μl 20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色,镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
    9.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
    对于细胞爬片,固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟,PBS漂洗两次,3%H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次,接上述第4步。
    对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,接上述第二步。
    注意事项:
    如果染色背景过高,在SP反应之后,DA使用说明 
        1. 细胞的增殖和细胞毒实验,一般可在96孔细胞培养板中进行。 
        2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞;细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素确定)。 
        3. 接种的细胞按照实验需要,送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物; 
        4.培养结束后,每孔加入20微升MTT溶液,在细胞培养箱内继续孵育3-6小时;   
        5.孵育结束后,每孔加入100微升Formanzan溶解液,在37℃细胞培养箱内再继续孵育,直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右,紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多,溶解的时间会略长。  
        6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片, 560-600nm范围的滤光片均可使用。

    产品细节图片1
    免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠IgG) 使用注意事项
    1. 微量试剂取用前请离心集液。
    2. Annexin V-EGFP,Propidium Iodide(PI)避光保存及使用。
    3. Propidium Iodide (PI)有毒,操作时请戴手套。
    4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
    5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
    6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
    7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
    CUL7 polyclonal antibody反应物种:Human; Rat测试范围:IHC包装:100 ul

    CUL3 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
    CD151 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:IHC包装:100 ul
    CTBP2 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
    CRTAM polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:WB; IHC包装:100 ul
    RAF1 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
    CRP polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:WB; IHC包装:100 ul
    CRMP1 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
    COX11 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse测试范围:WB; IHC包装:100 ul
    COX6B2 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse测试范围:WB; IHC包装:100 ul
    EMC8 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
    CLDN23 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse测试范围:WB包装:100 ul
    CLDND1 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse测试范围:WB; IHC包装:100 ul
    CNGA3 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse测试范围:WB包装:100 ul
    CNGA2 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
    Chelidonine伏格列波糖(标准品)  分子式:C15H24O4  性状:Powder  纯度:%

    (R)-Mandelic acid琥珀酸甲泼尼龙(标准品)  分子式:C15H22O  性状:Oil  纯度:97.0%
    Crotonyl alcohol六甲蜜胺(标准品)  分子式:C28H40O6  性状:Yellow powder  纯度:%
    Daurinoline甲氧氯普胺(标准品)  分子式:C20H24O6  性状:Oil  纯度:%
    Piceatannol奥扎格雷钠(标准品)  分子式:C24H30O9  性状:Oil  纯度:98.0%
    N-Benzoyl-(2R,3S)-3-phenylisoserineTG100-115  分子式:C17H26O2  性状:Oil  纯度:%
    Toosendanin盐酸地芬尼多(标准品)  分子式:C15H24O  性状:Oil  纯度:%
    Baccatine III盐酸乌拉地尔  分子式:C15H26O3  性状:Powder  纯度:%
    L-Cysteine盐酸乌拉地尔(标准品)  分子式:C15H24O5  性状:Powder  纯度:98.5%
    免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠IgG) 中文名称  香叶烯基转移酶1β抗体

         PGGT1B; GGTase-I beta; GGTase-1 beta; BGGI; Geranylgeranyl transferase type I subunit beta; Geranylgeranyl transferase type-1 subunit beta; GGTase-I-beta; GGTI; PGGT1B; PGTB1_HUMAN; Type I protein geranyl-geranyltransferase subunit beta.
         1mg/1ml
     0.2ml/200μg
    抗体来源  Rabbit  
    克隆类型  polyclonal
    交叉反应  Human, Mouse, Rat, Horse
    产品类型  一抗    
    研究领域  细胞生物 免疫学  
    蛋白分子量  predicted molecular weight: 42kDa
         Lyophilized or Liquid
     KLH conjugated synthetic peptide derived from human PGGT1 beta
         IgG
    纯化方法  affinity purified by Protein A
     Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
    产品应用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:50-200
    (石蜡切片需做抗原修复)
     not yet tested in other applications.
     optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.  
    保存条件  Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
    Important Note  This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

     

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      等,其中SP法是最常使用的方法。一般的sp法步骤啊,具体如下:1、烤片,68℃,20分钟,2、常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水;二甲苯I20min⇒二甲苯II20min⇒100%酒精10min⇒100%酒精10min⇒95%酒精5min⇒80%酒精5min⇒70%酒精5min3、阻断灭活内源性过氧化物酶:3%H2O237℃孵育10min,PBS冲洗3X5min;4、抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液(PH6.0)中用煮沸(95℃,15-20min),自然冷却20min以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温

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      相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 SP(streptavidin-perosidase)法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。 按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法);按结合方式可分为抗原 -抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧

    • 小鼠IgG定量EIA试剂盒使用说明

        上海西唐生物科技有限公司   021-55229872,  65333639   www.westang.com 小鼠IgG 定量 EIA 试剂盒使用说明   原理 本实验采用双抗体夹心  ELISA 法。用抗小鼠 IgG 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的  IgG 与单抗结合,加入酶标抗体,形成免疫复合物连接在板上,加入酶底物TMB ,出现蓝色,加终止液硫酸,颜色变黄,在 4 50 nm 处测 OD

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