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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
47
- 英文名:
SP Kit(Mouse)
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海一研
- 保存条件:
低温
- 规格:
3ml|6ml|18ml|110ml
英文名称:SP Kit(Mouse)
产品规格:3ml|6ml|18ml|110ml
发货周期:1~3天
本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG的免疫组化实验DAB显色。SP法检测试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。
保存:如果长时间不使用,请将所有试剂存放于-20℃,如经常使用,可将封闭液,3%H2O2和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。
操作步骤(以石蜡切片为例):
1.切片常规脱蜡至水(三次二甲苯,三次乙醇)。
2.3%H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3.可选步聚:
a、热修复抗原,将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5~10分钟后,反复1~2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1~2次。
b、酶消化,滴加消化液,37℃10分钟,PBS(pH7.2-7.4)洗涤2~3次。
c、跳过此步,直接进入下一步。
4.滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,免洗。
5.用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
6.根据用量,用稀释液将生物素-羊抗小鼠IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl生物素-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素-羊抗小鼠IgG工作液,20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。
7.根据使用量,用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl链酶亲和素-POD浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液,20-37℃,30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。
8.DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1mlPBS加入50μl 20×DAB显色液A,加入50μl 20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色,镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
对于细胞爬片,固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟,PBS漂洗两次,3%H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次,接上述第4步。
对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,接上述第二步。
注意事项:
如果染色背景过高,在SP反应之后,DA使用说明
1. 细胞的增殖和细胞毒实验,一般可在96孔细胞培养板中进行。
2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞;细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素确定)。
3. 接种的细胞按照实验需要,送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物;
4.培养结束后,每孔加入20微升MTT溶液,在细胞培养箱内继续孵育3-6小时;
5.孵育结束后,每孔加入100微升Formanzan溶解液,在37℃细胞培养箱内再继续孵育,直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右,紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多,溶解的时间会略长。
6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片, 560-600nm范围的滤光片均可使用。
免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠IgG) 使用注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-EGFP,Propidium Iodide(PI)避光保存及使用。
3. Propidium Iodide (PI)有毒,操作时请戴手套。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
CUL7 polyclonal antibody反应物种:Human; Rat测试范围:IHC包装:100 ul
CUL3 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
CD151 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:IHC包装:100 ul
CTBP2 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
CRTAM polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:WB; IHC包装:100 ul
RAF1 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
CRP polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:WB; IHC包装:100 ul
CRMP1 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
COX11 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse测试范围:WB; IHC包装:100 ul
COX6B2 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse测试范围:WB; IHC包装:100 ul
EMC8 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
CLDN23 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse测试范围:WB包装:100 ul
CLDND1 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse测试范围:WB; IHC包装:100 ul
CNGA3 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse测试范围:WB包装:100 ul
CNGA2 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
Chelidonine伏格列波糖(标准品) 分子式:C15H24O4 性状:Powder 纯度:%
(R)-Mandelic acid琥珀酸甲泼尼龙(标准品) 分子式:C15H22O 性状:Oil 纯度:97.0%
Crotonyl alcohol六甲蜜胺(标准品) 分子式:C28H40O6 性状:Yellow powder 纯度:%
Daurinoline甲氧氯普胺(标准品) 分子式:C20H24O6 性状:Oil 纯度:%
Piceatannol奥扎格雷钠(标准品) 分子式:C24H30O9 性状:Oil 纯度:98.0%
N-Benzoyl-(2R,3S)-3-phenylisoserineTG100-115 分子式:C17H26O2 性状:Oil 纯度:%
Toosendanin盐酸地芬尼多(标准品) 分子式:C15H24O 性状:Oil 纯度:%
Baccatine III盐酸乌拉地尔 分子式:C15H26O3 性状:Powder 纯度:%
L-Cysteine盐酸乌拉地尔(标准品) 分子式:C15H24O5 性状:Powder 纯度:98.5%
免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠IgG) 中文名称 香叶烯基转移酶1β抗体
别 名 PGGT1B; GGTase-I beta; GGTase-1 beta; BGGI; Geranylgeranyl transferase type I subunit beta; Geranylgeranyl transferase type-1 subunit beta; GGTase-I-beta; GGTI; PGGT1B; PGTB1_HUMAN; Type I protein geranyl-geranyltransferase subunit beta.
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Horse
产品类型 一抗
研究领域 细胞生物 免疫学
蛋白分子量 predicted molecular weight: 42kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human PGGT1 beta
亚 型 IgG
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:50-200
(石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
保存条件 Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
Important Note This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
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文献和实验等,其中SP法是最常使用的方法。一般的sp法步骤啊,具体如下:1、烤片,68℃,20分钟,2、常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水;二甲苯I20min⇒二甲苯II20min⇒100%酒精10min⇒100%酒精10min⇒95%酒精5min⇒80%酒精5min⇒70%酒精5min3、阻断灭活内源性过氧化物酶:3%H2O237℃孵育10min,PBS冲洗3X5min;4、抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液(PH6.0)中用煮沸(95℃,15-20min),自然冷却20min以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温
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上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639 www.westang.com 小鼠IgG 定量 EIA 试剂盒使用说明 原理 本实验采用双抗体夹心 ELISA 法。用抗小鼠 IgG 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 IgG 与单抗结合,加入酶标抗体,形成免疫复合物连接在板上,加入酶底物TMB ,出现蓝色,加终止液硫酸,颜色变黄,在 4 50 nm 处测 OD
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