中文名称:Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG) 英文名称:DAB chromogenic reagent kit For Western Blotting 产品规格:1盒 发货周期:1~3天 工作原理:聚合标记法是一种酶标记方法,其敏感性比普通酶标法有明显提高。用于 Western Blotting的免疫学检测,更能体现其优点。不仅能大量地节约一抗,更重要的是使条带更清晰,甚至能检测出普通酶标法无法检测出的微量条带。DAB 是过氧化物酶最重要的显色剂之一,反应产物为不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物,适合于免疫印迹的显色反应。本产品采用特殊配方,具有操作简单,储存稳定,信号灵敏度高,持续时间长,背景低,结果易保存等优点。 保存条件:-20℃冷冻保存。DAB 显色试剂应避光保存。 有效期:一年。 试剂盒的内容: (1)封闭试剂:10 g 蛋白干粉×2 包。 (2)浓缩抗体稀释液:20 ml×1 瓶,为10倍浓缩液。 (3)聚合过氧化物酶标记兔抗大鼠IgG0.2ml,效价 1:200-400。亲和纯化抗体,经聚合法标记过氧化物酶。 (4)DAB 显色试剂,含: 显色剂 A:DAB×40倍浓缩液,3ml。 显色剂 B:H2O2×40倍浓缩液,3ml。 显色剂 C:×40倍 TBS 浓缩缓冲液,3ml。 使用说明: 需要而未提供的试剂和器材: 1.转印了蛋白样品的NC 膜或PVDF 膜:通过 SDS-PAGE 凝胶电泳分离蛋白质抗原,将 PAG 胶上的蛋白质转印到硝酸纤维素膜(NC 膜)或PVDF 膜上。 2.稀释缓冲液:使用中性稀释缓冲液即 0.02 M PBS或0.02M TBS(AR0144)配制封闭液和抗体稀释液。0.02 M PBS(pH7.2-7.6):1000 ml 蒸馏水加 Na2HPO4 2.8 g ,NaH2PO4 0.4 g,NaCl 8.5 g。如果用的是含水磷酸盐,应加上分子式中水的含量。0.02M TBS(pH7.2-7.6):1000ml 蒸馏水中加 Tris 2.42g,NaCl 9g; 纯乙酸或浓盐酸调节 pH 值(7.2-7.6)。 3.洗涤缓冲液:每 1000ml 中性稀释缓冲液中加入 0.5 ml Tween20 即可。 4.一抗:选择适合的一抗,用抗体稀释液稀释相应的一抗,一般特异性抗体工作浓度为1μg/ml,具体的稀释度取决于特异性的一抗和膜上的抗原的量。 5.摇床:膜的封闭、抗体孵育和洗涤都需平稳摇晃,需在摇床上操作。 6.相机:记录结果。 操作程序: 1.通过聚酰胺凝胶电泳分离蛋白样本和分子量标准。 2.将蛋白样本转移至硝酸纤维素膜或PVDF 膜上。 3.封闭硝酸纤维膜:用封闭蛋白干粉 2 g,加稀释缓冲液 100 ml,20-37℃封闭 1-2 小时。用量以浸没整张膜为准。 4.用洗涤缓冲液洗涤硝酸纤维素膜 5分钟,1次。 5.配制抗体稀释液:取 90 ml 稀释缓冲液加 1 g 封闭蛋白干粉和 10 ml浓缩抗体稀释液即可。一抗、二抗均用此稀释液稀释。 6.硝酸纤维膜孵育一抗:用抗体稀释液稀释相应的一抗,一般特异性抗体浓度 1μg/ml,20-37℃孵育2 小时左右。如果缺乏特异性的条带或阳性不强,应提高一抗的浓度;如果有非特异性的条带,应提高一抗的稀释度。 7.用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维素膜 3次,每次 5分钟。 8.硝酸纤维膜孵育二抗:用抗体稀释液稀释相应的酶标二抗,效价 1:200-400。37℃孵育一个半小时左右。用户可根据实际染色情况对稀释度做适当调整。 9.用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维膜 4次,每次 5分钟。 10.DAB 显色:使用 DAB 显色试剂。按每 2 ml 蒸馏水加显色剂 A,B,C 各1滴,混匀。混匀后加至膜上。室温显色。一般显色1-30分钟。 若无背景出现则可继续显色。显色后用蒸馏水洗涤以终止反应。使用说明 1. 细胞的增殖和细胞毒实验,一般可在96孔细胞培养板中进行。 2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞;细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素确定)。 3. 接种的细胞按照实验需要,送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物; 4.培养结束后,每孔加入20微升MTT溶液,在细胞培养箱内继续孵育3-6小时; 5.孵育结束后,每孔加入100微升Formanzan溶解液,在37℃细胞培养箱内再继续孵育,直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右,紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多,溶解的时间会略长。 6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片, 560-600nm范围的滤光片均可使用。
Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG) 使用注意事项 1. 微量试剂取用前请离心集液。 2. Annexin V-EGFP,Propidium Iodide(PI)避光保存及使用。 3. Propidium Iodide (PI)有毒,操作时请戴手套。 4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。 5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤。 6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。 7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。 SRPK1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul DRG1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul TBX2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul RPLP2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul RNASET2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul DHCR7 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul DLD rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul SLC38A1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, WB包装:100 ul NEFM rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul TRPM3 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul BATF rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul PTPN13 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul MED15 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul MAPRE3 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul NDUFAF4 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul α-Lapachone羧基甲氧基胺半盐酸盐(>98.0%(T)) 分子式:C15H14O3 性状:Powder 纯度:98.0% 9-Methoxy-α-lapachone吉拉德试剂 P(>95.0%(T)) 分子式:C23H38O2 性状:Powder 纯度:95.5% 4,9-Dihydroxy-α-lapachone4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(含氮量:23.50-24.30 %) 分子式:C12H8O5 性状:Yellow powder 纯度:97.0% IsodiospyrinN-叔丁基-α-苯基硝酮(>98.0%(HPLC)(T)) Ethyl (1-hydroxy-4-oxocyclohexa-2,5-dien-1-yl)acetate16-DOXYL-硬脂酸自由基(>95.0%(HPLC)(T)) 分子式:C30H40O7 性状:Powder 纯度:96.0% 16-Acetoxy-7-O-acetylhorminoneCLA (>98.0%(HPLC)) 分子式:C28H40O6 性状:Powder 纯度:97.0% α-TocopherolquinoneMCLA (>98.0%(HPLC)) 分子式:C46H78O4 性状:Powder 纯度:98.0% HorminoneFCLA 自由酸[化学发光试剂] 分子式:C34H50O9 性状:Powder 纯度:95.0% Dihydrotanshinone I红-CLA(含氮量:9.00-10.30 %) 分子式:C34H52O9 性状:Powder 纯度:98.0% Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG) 中文名称 MAWD结合蛋白抗体 别 名 MAWBP; MAWD binding protein; MAWD-binding protein; MAWDBP; PBLD; PBLD_HUMAN; Phenazine biosynthesis like domain containing protein; Phenazine biosynthesis like protein domain containing; Phenazine biosynthesis-like domain-containing protein; Unknown protein 32 from 2D page of liver tissue; Unknown protein 32 from 2D-page of liver tissue; FLJ14767; FLJ35507; OTTHUMP00000019698; OTTHUMP00000082489. 浓 度 1mg/1ml 规 格 0.2ml/200μg 抗体来源 Rabbit 克隆类型 polyclonal 交叉反应 Human, Mouse, Rat, Cow, Horse 产品类型 一抗 研究领域 细胞生物 免疫学 蛋白分子量 predicted molecular weight: 32kDa 性 状 Lyophilized or Liquid 免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human PBLD/MAWBP 亚 型 IgG 纯化方法 affinity purified by Protein A 储 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4 产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:50-200 (石蜡切片需做抗原修复) not yet tested in other applications. optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user. 保存条件 Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C. Important Note This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.