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- PCR法和培养发支原体检测
- 长沙 | 上海 | 南京
- 2025年07月11日
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Cas9X | 海星生物
- 服务名称：
细胞支原体检测服务
- 规格：
检测报告
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细胞株支原体检测服务
体外培养环境中，细胞自身没有抗污染的能力，即使培养基会添加抗生素，抵抗污染的能力也很有限。常见的微生物污染为细菌、真菌、支原体和病毒等，其中又以支原体污染最为普遍棘手。一旦污染了支原体的细胞将无法正常形成单克隆，而且细胞转染过程容易死亡，细胞实验效率极低。为了维持实验的稳定，必须对所有的实验使用到的细胞进行支原体的检测。
支原体污染后，细胞不会有明显的死亡现象，且支原体通常能与细胞长期共存，培养体系亦无浑浊现象，然而实际上却可能存在细胞形变，DNA合成受抑制等诸多问题，并且即使发现支原体污染也较难彻底清除，因此确保细胞在实验初期无微生物污染是至关重要的。
采用PCR法对目的细胞进行细菌、真菌和支原体等检测。以微生物16（18）SrRNA基因为靶基因，设计通用引物并建立PCR扩增体系。
如常用的两个针对16S rRNA基因的通用引物对为27F, 1492R和63F, 1387R。
27F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'；1492R：5'-TACCTTGTTACGACTT-3'
63F：5’-CAGGCCTAACACATGCAAGTC-3’；1387R：5’-GGGCGGTGTACAAGGC-3’
图1 细胞样品为PCR阳性，将PCR产物送测序，经BLAST比对为牛支原体
研究调查表明，约有20多种支原体能污染细胞（尤其是传代细胞），95%以上是牛源性，常见为口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.Hyorhinis）和菜氏无胆甾原体（A.laidlawii）。
通用的快速基因诊断技术，经大量实验证实，能保证所选引物具有良好的保守性和特异性，重复性好且操作简单，相较于传统的微生物培养法，能有效地缩短实验周期至3天，达到快速反馈检测结果的目的。
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文献和实验原理 利用萤光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。 测试步骤用间接步骤，将待测细胞悬浮液或细胞培养液接种于指示细胞培养液中（indicator cell
肉汤培养基，11份PCR检测Mg-DNA阳性的尿道分泌物标本中，有6份在其中呈阳性生长。 国内学者对SP-4培养基进行了改良。赵季文等[4]利用改良的SP-4培基从性病及性乱人群中分离Mg获得成功，初代生长时间在30天以上，平均为37.83天，最长为55天。 1.2组织细胞培养法 组织细胞培养支原体，可为支原体提供良好的类似体内的生长环境。早在60年代，Chanock等[5]报道了肺炎支原体（Mp）在组织细胞中的生长。90年代，Jensen等[3，6]开始尝试用细胞
细胞治疗是细胞和基因治疗的重要组成部分，它通过使用特定类型的细胞来修复、替换或调节受损的组织和器官。在细胞治疗中，不同类型的细胞因其独特的生物学特性而被广泛应用于多种疾病的治疗。以下是一些常用的细胞类型及其在细胞治疗中的应用。 （1）免疫细胞 免疫细胞是细胞治疗中最重要且研究最多的细胞类型之一，主要包括 T 细胞、自然杀伤细胞（NK 细胞）和树突状细胞（DC 细胞）。 T 细胞：T 细胞是人体免疫系统的核心细胞，具有强大的抗肿瘤能力。CAR-T 细胞疗法是目前最成功的免疫细胞治疗技术
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