BIOCREATE ™ Protein A 磁珠

产品概述
BIOCREATET Protein A磁珠是粒径为200nm 的纳米磁珠表面上共价结合了大量的 Protein A蛋白，纳米级磁珠提供的超大比表面积，具有更多的结合位点，磁珠使用量更少，非特异性吸附率低。重组 Protein A蛋白更适合于结合 mouselgG2a,IgG2b,lgA,rabbitlgG,以及human lgGllgG2和lgG4。本产品广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀 (IP) 或免疫共沉淀 (Co-IP)。由于采用磁性分离，使得每次IP和 Co-IP 可以节省 40%的时间。



产品特性
基质:硅基磁珠
配体:重组 Protein A蛋白
粒径:200nm
磁珠浓度:10mg/mL
结合能力>0.9mghlgG/mL磁珠适用范围IP，Co-IP，ChIP，RIP等保质期在208C稳定保存两年

操作流程
注意:缓冲液自行准备或直接购买我司IP 试剂盒贴壁细胞样品:
1.移去培养基，用PBS洗细胞两次。
2.收集细胞至1.5mLEP 管内，按比例加入IP Lysis/WashBuffer，同时加入PMSF等相应的抑制剂，混后置于冰上静置5-20min (期间混匀几次)。
3.4℃12000-16000xg,10min 离心收集上清液，置于冰上以备后续实验(或置于-80°C长期保存)。培养血IP Lysis/Wash Buffer 推荐使用体积:培养皿大小/表面积IP Lysis/Wash Buffer 体积100 mm x100 mm 500-1000ul
100 mm x60 mm 100-300uL
6孔板100-200uL

悬浮细胞样品
1.4°C、5001000xg、10min，收集细胞，弃上清。
2用PBS洗细胞一次，即用 PBS将细胞团重悬，4C5001000xg、5min，收集细胞，弃上清。
3用预冷的IP Lysis/Wash Buffer 重悬细胞。每50mg细胞使用500uLIP Lysis/Wash Buffer。同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置520min (期间混句几次)。
4.4C12000C16000xg,10min 离心收集上清液，置于冰上以备后续实验(或置于-80°C长期保存)。

血清样品
一般建议建议用IP Lysis/Wash Buffer 稀释血清样品至目标蛋白终浓度为50~150ug/mL，置于冰上备用 (或置于-20°C长期保存)。

免疫复合物的制备
注意:样品所需的量和解育时间均依赖于每个特定的抗体抗原体系，因而可能需要优化才能得到最大产量。以下实验方案针对 210ug 亲和纯化的抗体，根据需要可以按比例放大。
1.在离心管中，将每个样品的细胞裂解液与2-10ug 免疫沉淀抗体结合。每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为 500-1500ug。
2.用IP Lysis/Wash Buffer将抗体以及制备好的样品稀释至300-500uL。
3.在室温下孵育1-2h，或2-4h，以形成免疫复合物。

免疫沉淀
注意:为保证磁珠均匀分布，使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中磁珠。
1.将20-50uL的Protein A磁珠加入1.5mL离心管中。
2向磁珠中加入500uL预冷 PBS，轻柔混匀。
3.将离心管放入磁力架中收集磁珠到离心管的一边。去除上清。
4.向离心管中加入200-500uLIP Lysis/Wash Buffer。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀 1min。用磁力架收集磁珠。去除上清。
5.将抗原样品/抗体混合物加入装有磁珠的离心管中，保持混匀室温下孵育1-2h，或4-24h。
6.用磁力架收集磁珠，除去未结合的样品，保存以备分析。
7.向离心管中加入1000uLIP Lysis/Wash Buffer,轻柔混匀磁珠 5-10min。收集磁珠，弃上清。再重复洗两次。
8.变性洗脱:向离心管中加入80-100uL   SDS-PAG Sample Loading Buffer (1x)，将样品置于100°C水浴或者金属浴中加热10min。通过磁力架分离磁珠保留含有目的抗原的上清备注:如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脱方式。低pH洗脱:向离心管中加入100uLElution Buffer。保持混匀在室温下孵育离心管510min。通过磁力分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。每 100uL 洗出液中加入20uL Neutralization Buffer 来中和低pH。

注意事项
1.进行实验操作之前，请务必认真阅读本操作说明书。
2.请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。
3.P实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到IP Lysis/Wash Buffer 的影响，因此可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。
4.磁珠使用前应充分振荡均匀。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
5.本产品仅供科学研究使用。
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