- ¥1396
- KALANG/康朗生物
- KL-11221
- 中国/上海
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
蜡样芽胞杆菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件：
请于-20℃条件下保存
蜡样芽孢杆菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）
◆ 产品说明
致病菌检测系列基于独特的恒温荧光检测技术，可针对食品、饲料等样品中的致病微生物的特异核酸片段进行扩增，仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化，自动判读结果。本产品用于蜡样芽孢杆菌的检测。检出限为 103 CFU/ml。
◆ 产品组成（48 测试）
试剂 含量
A-Bac-I 1200μL × 1 支
B-I 55μL × 1 支
C-I 1200μL × 1 支
NG-I 50μL × 2 支
PG-Bac-I 50μL × 1 支
◆ 适用仪器
Dhelix 1610、Dhelix 3210、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308c 等恒温荧光检测仪，ABI 7500，LightCycler480，CFX 96 等荧光 PCR 仪。
◆ 自备耗材和仪器
①灭菌 1.5mL 或 2.0mL 离心管；②灭菌 0.2mL PCR 管或八联管；③冰盒；④移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；⑤离心机；⑥涡旋混匀器；⑦金属浴
◆ 注意事项
1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1）第一区：试剂准备区。
2）第二区：样本制备区。
3）第三区：模板添加区。
4）第四区：扩增及产物分析区。
★ 分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
7. 检出限为 103 CFU/ml 是以 1 ml 103CFU/ml 增菌液离心后收集菌体再提取的细菌基因组 DNA 作为模板。
◆ 样品处理
参照《SN/T 3932-2014》中的 3.4.1 处理样品，对样品进行前增菌，制称取样品 25 g，放入盛有 225 mL LB 培养基中进行均质，均质取 2~3 个适宜稀释度的样品匀液 30 ℃±1 ℃培养9 h~18 h。
详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
◆ 实验操作
将试剂完全解冻，各组分离心 30s。
1. 试剂配制（试剂准备区，放置于冰盒中进行）：
若有 N 个待检样品，则参照下表，按照 N+2 个数量计算各组分用量（N 个待检样品+1 个阴性对照+1 个阳性对照），将反应液置于 0.6ml 或者 1.5ml 离心管中，涡旋混匀，离心 30 秒，分装于 0.2ml PCR 管中，并向每管加入 1滴 C-I（约 20μl）。
试剂 使用量
A-Bac-I 22×(N+2)μL
B-I 1×(N+2)μL
反应液总体积 23×(N+2)μL
2．模板制备（样本制备区）
建议使用试剂配套细菌组 DNA 提取系列产品，具体过程详见产品说明书。
3．添加模板（模板添加区，放置于冰盒中进行）
在步骤 1 中已含有反应液的 PCR 管中加入 2μL 模板，顺序为 NG-I、待测样品模板、PG-Bac-I。涡旋混匀30s，离心 1min，立即进行扩增反应。
4. 扩增反应（扩增及产物分析区）
①恒温仪器 63℃条件下反应 45min。
②若使用荧光定量 PCR 仪，则荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 None，将 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作为一个循环，于 63℃ 45 s 处收集荧光信号，45 个循环。
其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
◆ 结果判定
①仪器自动判定结果，若显示“阳性”，则样品中含有蜡样芽孢杆菌；若显示“阴性”，则样品中不含有蜡样芽孢杆菌或含量低于检测限。
②在荧光定量 PCR 仪上，根据有无“S”型扩增曲线判定结果。若有“S”型扩增曲线，则样品中含有蜡样芽孢杆菌；若无“S”型扩增曲线，则样品中不含有蜡样芽孢杆菌或含量低于检测限。
★ NG 反应管结果显示“阴性”，PG 反应管结果显示“阳性”，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。
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文献和实验法是一项新型的核酸扩增技术，一小时内可以检测出IHHNV结果。广州双螺旋基因技术有限公司根据恒温PCR原理，研发出Dhelix-C水产病害检测仪，配合使用恒温荧光法IHHNV核酸检测试剂盒，在65°C的恒温条件下反应，利用Bst DNA聚合酶完成置换扩增。反应体系中含有荧光染料，Dhelix-C水产病害检测仪能通过光学软件检测扩增后荧光信号的变化，将荧光信号表达为扩增曲线，同时仪器自动判读检测结果，从取样到结果显示仅需1~2个小时，仪器操作简单，非专业背景人员也可以轻松掌握，更适用于对虾IHHNV现场
方法没有离子辐射且价格便宜，其成本约为几千美元。这种装置的另一个优点是它的工艺及实施以常用的光盘和单元电话为基础的，从而简便、易行。 5.2 分子信标技术用于SARS的诊断 2003年SARS病毒在中国内地的出现以及在全球部分国家的肆意和传播，给人类健康提出了严峻的挑战。许多国家的科研人员都在开发快速和精确检测SARS病毒的方法和技术，诸如RT-PCR、ELISA、免疫荧光法等，并已经在推出相应的检测试剂盒。但是，目前这些检测仍然需要结合临床体征的判断，这主要是由于这几种方法还存在
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