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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
51
- 英文名：
Apoptotic Cell Hoechst 33258 Detection Kit
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海一研
- 保存条件：
低温
- 规格：
100T
中文名称：Hoechst33258染色试剂盒
英文名称：Apoptotic Cell Hoechst 33258 Detection Kit
产品规格：100T
发货周期：1～3天
细胞凋亡时产生最显著的变化是染色体固缩，DNA 裂解使细胞核形态产发生变化。本试剂盒提供的荧光染料Hoechst 33258 是一种无毒、水溶性双苯咪唑类化合物，可作为荧光探针与DNA 分子结合。
在凋亡细胞中，细胞膜对Hoechst 33258 的摄取增高，并且由于染色体高度浓缩，Hoechst 33258 与之结合增强，染色呈强蓝色荧光，而正常细胞只呈微弱荧光，死细胞则不被染色，由此可检测出凋亡。
操作方法
1. 用适当的方法诱导细胞凋亡；
2. 用冷Buffer A 洗涤细胞二次，离心收集106 细胞于1.5mL 微量离心管中；（贴壁细胞原位固定染色）
3. 加入1mL 的4%溶液(用户自备)，4℃固定细胞10min；
4. 离心去固定液，用Buffer A 洗两遍；离心后留50～100μL Buffer A 重悬细胞；
5. 取上步骤50～100μL 细胞悬液涂片，自然晾干；
6. 滴加100μL Hoechst 33258 工作液（备注1），室温染色10 min，水冲净晾干；
7. 以紫外光340nm 波长激发，荧光显微镜下观察。
储存：2-8℃，避光，有效期一年。
使用说明
1. 细胞的增殖和细胞毒实验，一般可在96孔细胞培养板中进行。
2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞；细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定）。
3. 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物；
4．培养结束后，每孔加入20微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育3－6小时；
5．孵育结束后，每孔加入100微升Formanzan溶解液，在37℃细胞培养箱内再继续孵育，直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会略长。
6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片， 560-600nm范围的滤光片均可使用。
Hoechst33258染色试剂盒使用注意事项
1． 微量试剂取用前请离心集液。
2． Annexin V-EGFP，Propidium Iodide（PI）避光保存及使用。
3． Propidium Iodide （PI）有毒，操作时请戴手套。
4． 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5． 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
6． 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7． 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
瘦素受体抗体英文全称Salmonella antigen英文简称Salmonella Ag检测范围6100nmol/L-
项韧带弹性蛋白抗体英文全称ALVP27-AG英文简称ALVP27-AG检测范围6101nmol/L-80pg/mL
神经突触蛋白NGL3抗体英文全称Pullorosis Antibody英文简称PD-Ab检测范围6102nmol/L-200pg/mL
致盲基因LCA5蛋白抗体英文全称Aldo-keto reductase family 1 member B10英文简称AKR1B10检测范围6103nmol/L-24U/L
致盲基因LCA5样蛋白抗体英文全称Yolk fatty acids英文简称YFA检测范围6104nmol/L-400μmol/L
大脑边缘系统相关膜蛋白抗体英文全称calcium英文简称Ca检测范围6105nmol/L-400mg/L
神经突触粘附样分子1抗体英文全称Marek'sDisease antibody英文简称MS-Ab检测范围6106nmol/L-
富含亮氨酸重复序列/Ⅲ型纤维连接蛋白4抗体英文全称Infectious bronchitis Virus英文简称IBV检测范围6107nmol/L-
层粘蛋白α4抗体(Lamininα4)英文全称AIV-H5英文简称AIV-H5检测范围6108nmol/L-10ng/mL
溶酶体相关膜蛋白4α抗体英文全称AIV-H5N1-IgG英文简称AIV-H5N1-IgG检测范围6109nmol/L-
分化相关基因14抗体英文全称AIV-H5N1英文简称AIV-H5N1检测范围6110nmol/L-
β内酰酶样蛋白2抗体英文全称Ex-fatty acid-binding protein英文简称Ex-FABP检测范围6111nmol/L-800pg/mL
神经突触粘附样分子4抗体英文全称Glutathione S transferases-α3英文简称α3-GST检测范围6112nmol/L-20U/L
乳清蛋白α抗体英文全称Interleukin 2 Receptor英文简称sIL-2R检测范围6113nmol/L-100pg/mL
核纤层蛋白B2抗体英文全称Mycoplasma synoviae antibody英文简称MS-Ab检测范围6114nmol/L-1000ng/ml
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Oligo快速复性液，10×COL25A1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
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裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒（含高效转化液）CDKN2A rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
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在凋亡细胞中，细胞膜对Hoechst 33258 的摄取增高，并且由于染色体高度浓缩，Hoechst 33258 与之结合增强，染色呈强蓝色荧光，而正常细胞只呈微弱荧光，死细胞则不被染色，由此可检测出凋亡。
操作方法
1. 用适当的方法诱导细胞凋亡；
2. 用冷Buffer A 洗涤细胞二次，离心收集106 细胞于1.5mL 微量离心管中；（贴壁细胞原位固定染色）
3. 加入1mL 的4%溶液(用户自备)，4℃固定细胞10min；
4. 离心去固定液，用Buffer A 洗两遍；离心后留50～100μL Buffer A 重悬细胞；
5. 取上步骤50～100μL 细胞悬液涂片，自然晾干；
6. 滴加100μL Hoechst 33258 工作液（备注1），室温染色10 min，水冲净晾干；
7. 以紫外光340nm 波长激发，荧光显微镜下观察。
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使用说明
1. 细胞的增殖和细胞毒实验，一般可在96孔细胞培养板中进行。
2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞；细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定）。
3. 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物；
4．培养结束后，每孔加入20微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育3－6小时；
5．孵育结束后，每孔加入100微升Formanzan溶解液，在37℃细胞培养箱内再继续孵育，直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会略长。
6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片， 560-600nm范围的滤光片均可使用。
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1． 微量试剂取用前请离心集液。
2． Annexin V-EGFP，Propidium Iodide（PI）避光保存及使用。
3． Propidium Iodide （PI）有毒，操作时请戴手套。
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7． 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
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