Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒

中文名称：Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒
英文名称：Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
产品规格：50次
发货周期：1～3天
本试剂盒是一种采用Annexin V-FITC与PI双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。另外一种活细胞非透过性荧光染料碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)不能通过完整的活细胞，但能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色， 因此通常将Annexin V与PI配合染色， 以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。
操作步骤：
1、细胞样品的准备：
a．对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。
b．对于悬浮细胞：1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。
2、用去离子水按 1:3 稀释Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去离子水)。
3、用 250μl Binding Buffer重新悬浮细胞，调节其浓度为 1×106/ml。
4、取 100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V/FITC 和 10μl 20μg/ml的PI溶液。
5、混匀后于室温避光孵育 15 分钟。
6、在反应管中加 400μl PBS，流式细胞仪(FACS)分析。
储存条件：2～8℃，避光保存


Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒使用注意事项
1． 微量试剂取用前请离心集液。
2． Annexin V-EGFP，Propidium Iodide（PI）避光保存及使用。
3． Propidium Iodide （PI）有毒，操作时请戴手套。
4． 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5． 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
6． 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7． 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
使用说明 
    1. 细胞的增殖和细胞毒实验，一般可在96孔细胞培养板中进行。 
    2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞；细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定）。 
    3. 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物； 
    4．培养结束后，每孔加入20微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育3－6小时；   
    5．孵育结束后，每孔加入100微升Formanzan溶解液，在37℃细胞培养箱内再继续孵育，直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会略长。  
    6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片， 560-600nm范围的滤光片均可使用。
膜粘连蛋白 I抗体英文全称SCETIN英文简称SCETIN检测范围760nmol/L-4000pg/ml
膜粘连蛋白 Ⅱ抗体英文全称Keratinocyte Growth Factor 2英文简称KGF2检测范围761nmol/L-800pg/mL
活化转录因子1抗体英文全称HA tag英文简称HA tag检测范围762nmol/L-800pg/mL
水通道蛋白4抗体英文全称systemic lupus erythematosus英文简称SLE检测范围763nmol/L-800ng/mL
活化复制因子2抗体英文全称Cathepsin F英文简称CTSF检测范围764nmol/L-80ng/mL
膜粘连蛋白5抗体英文全称Biopyrrin英文简称Biopyrrin检测范围765nmol/L-4000pg/mL
重组膜粘连蛋白5抗体英文全称Pentraxin 英文简称PTX检测范围766nmol/L-20ng/mL
衔接蛋白α-Adaptin抗体英文全称Cholera toxin英文简称CT检测范围767nmol/L-800pg/mL
凋亡蛋白活性因子-1抗体（C端）英文全称Uncoupling Protein 2英文简称UCP2检测范围768nmol/L-20ng/ml
凋亡蛋白活性因子-1抗体（N端）英文全称Titin IgG antibody英文简称Titin IgG Ab检测范围769nmol/L-60pg/ml
淀粉样肽前体蛋白抗体英文全称Abeta IgG antibody英文简称Abeta IgG检测范围770nmol/L-24ng/ml
血管紧张素原抗体英文全称MAP1LC3B英文简称MAP1LC3B检测范围771nmol/L-100ng/ml
雄激素受体抗体英文全称Family with sequence similarity 19  member A4英文简称FAM19A4检测范围772nmol/L-8ng/mL
自分泌运动因子抗体英文全称anti rubella virus IgG antibody英文简称anti-RV IgG检测范围773nmol/L-800mg/L
细胞死亡调节蛋白抗体(凋亡、半胱酸蛋白酶激活抑制剂)英文全称Apat-1英文简称Apat-1检测范围774nmol/L-24ng/ml
3% NaC1精氨酸脱羧酶发酵管20支3% NaC1精氨酸脱羧酶发酵管BR
3.5% NaC1精氨酸脱羧酶发酵管20支3.5% NaC1精氨酸脱羧酶发酵管BR
赖氨酸脱羧酶肉汤发酵管20支赖氨酸脱羧酶肉汤发酵管BR
3% NaC1赖氨酸脱羧酶发酵管20支3% NaC1赖氨酸脱羧酶发酵管BR
3.5% NaC1赖氨酸脱羧酶发酵管20支3.5% NaC1赖氨酸脱羧酶发酵管BR
色氨酸肉汤发酵管20支色氨酸肉汤发酵管BR
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒Fructus mori桑椹PCR鉴定试剂盒  中文名称  精氨酸tRNA的蛋白转移酶1抗体别    名  Arginine tRNA protein transferase 1; Arginyl-tRNA--protein transferase 1; Arginyl-tRNA-protein transferase; Arginyltransferase 1; R transferase 1; EC 2.3.2.8; AI225793; ATE1_HUMAN.研究领域  细胞生物 免疫学 转录调节因子蛋白分子量  predicted molecular weight: 59kDa性    状  Lyophilized or Liquid免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human ATE1
Folium mori桑叶PCR鉴定试剂盒   中文名称  共济失调蛋白7样1抗体别    名  Ataxin 7 like 4; Ataxin 7 like protein 1; Atxn7l4; MGC28883; RGD1564242; FLJ40255; FLJ58242; KIAA1218; mCG_142289; MGC10760; MGC33190; tcag7.1150; 2810423G08Rik; AT7L1_HUMAN.研究领域  细胞生物 免疫学 神经生物学蛋白分子量  predicted molecular weight: 91kDa性    状  Lyophilized or Liquid免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human ATXN7L1
Ramulus mori桑枝PCR鉴定试剂盒  中文名称  孤独症易感基因2蛋白抗体（自闭症相关蛋白1）别    名  Autism related protein 1; Autism susceptibility candidate 2; Autism susceptibility gene 2 protein; FBRSL2.研究领域  细胞生物 神经生物学蛋白分子量  predicted molecular weight: 139kDa性    状  Lyophilized or Liquid免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human AUTS2
Semen astragali complanati沙苑子PCR鉴定试剂盒    中文名称  脊髓小脑共济失调2型蛋白抗体别    名  Ataxin 2; ATXN2; Olivopontocerebellar ataxia 2, autosomal dominant; SCA2; Spinocerebellar ataxia type 2 protein; TNRC13; Trinucleotide repeat containing gene 13 protein.研究领域  细胞生物 神经生物学 表观遗传学蛋白分子量  predicted molecular weight: 144kDa性    状  Lyophilized or Liquid免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human ATX2 (771-815aa)
Pseudobulbus cremastrae seu pleiones山慈菇PCR鉴定试剂盒      中文名称  芳香基硫酸酯酶H抗体别    名  Arylsulfatase H; ASH; ARSH_HUMAN.研究领域  心血管 细胞生物 免疫学蛋白分子量  predicted molecular weight: 63kDa性    状  Lyophilized or Liquid免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human ARSH