MTT检测试剂盒

中文名称：MTT检测试剂盒
文名称：MTT Assay Kit
产品规格：500次
发货周期：1～3天
MTT广泛用于检测细胞生长，其原理是MTT可以被活细胞线粒体内的脱氢酶还原生成深紫色的formazan结晶，而死细胞则无此活性。深紫色的formazan结晶被溶解后可以通过测定490nm波长的光吸收而测定出其浓度，并由此推测出细胞的活力，细胞增殖越旺盛，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。其原理如下：

产品特点：
1．采用独特的Formazan溶解液，可以充分溶解formazan，减少误差。
2．背景低，灵敏度高，线性范围宽，重复性好。
3．本产品为足够500次(5个96孔细胞培养板)微孔板检测。
4．可用于生物活性因子活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验、肿瘤放射敏感性测定等。
储存条件：低温运输、-20℃保存(但溶液B也可以常温运输和保存)，有效期一年。
使用方法：
下面操作是检测细胞毒性的试验，其他应用跟此类似或更简单(如生长曲线试验)，操作步骤可以以此为基础稍作修改即可，故不再赘述。
㈠、接种细胞
1．按常规胰酶消化法消化汇合的单层细胞，收集到含血清的培养基中。
2．200g离心5分钟收集细胞沉淀。
3．用培养基重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬浮液并计数。
4．将细胞稀释到2.5×103个/mL～5×10个/mL之间(需要根据细胞的生长速度决定)，如果不知道生长数度，一般可以稀释到1×10个/mL。
5．将足够量的细胞悬液转移到培养皿中(便于用排枪取样)。一个96孔板的MTT检测需要约20mL的细胞悬液。
6．用排枪在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL细胞悬液(对正常细胞)。如果是肿瘤细胞，则加入100μL肿瘤细胞悬液和100μL培养基(总体积为200μL)。注意：一定要把细胞加在孔的正中，否则细胞会聚集在孔的角落处，影响试验。
7．用排枪在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟细胞悬液等体积的培养基。第1 列各孔将作为+培养基-细胞+MTT对照(用于测OD时调零)，第12列加培养基的作用是减少边缘效应对第11 列反应的影响。
8．按常规细胞培养方法在37℃和5% CO2条件下孵育1-3天，使细胞进入指数生长期。
㈡、药物处理
9．用培养基将药物稀释到8个待测浓度(如果不知道待测浓度，则需要预试验确定)，一般一种药物需要做3块平行板。
10．去除第2到第11列(共10列)各孔中的培养基(不要触动细胞)，保留第1 列和第12列各孔中的培养基。
11．在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鲜培养基，这些孔将作为+培养基+细胞-药物的对照。
12．在第3到第10列(共8列)各孔中加入8个浓度梯度的待测药物，每列加入一个浓度的药物。
13．按常规方法把96孔板继续放在在37℃和5% CO2条件下孵育一定的时间，此段时间即为药物处理细胞的时间，由用户自己决定。
14．处理结束后去除第2 到第11列(共10列，均含细胞)所有孔中的培养基，并再加入100μL新鲜培养基。
15．每天换培养使细胞数量扩增2-3倍(所需时间随细胞不同而不同)。
㈢、存活细胞计数
16．在生长末期，去除第1到第11列各孔中的培养基后，再加入100μL新鲜培养基和10μL溶液A(含MTT成分)，用锡箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2条件下继续培养4-8小时。注意：溶液A在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴至全部溶解，摇匀后使用。MTT有致癌性，一定要带手套操作。
17．小心吸弃孔内培养基(含溶液A)。由于培养基可能会影响光吸收，最好尽可能去除。
18．每孔加入100μL溶液B，置摇床上低速振荡10分钟，使MTT形成的formazan结晶物充分溶解。
19．由于产物不稳定，故需要立即在酶联免疫检测仪上选择490nm测定吸光度。
 注意：用第1 列各孔(+培养基-细胞+MTT对照)调零。
20．计数同样处理的各次重复的平均值。
21．以药物浓度为横轴，以吸光度为纵轴绘制曲线。由于各处理吸光度绝对值差别很大，一般需将其转化成生长抑制率(以不加药物的第2和第11列各孔数据的平均数作为100%)，这样便于计算出IC50，用于各种药物处理效果的比较。注意：如果测生长曲线，则以时间为横轴。正常生长曲线一般呈现S型，具有促进作用的则斜率加大。
使用说明 
    1. 细胞的增殖和细胞毒实验，一般可在96孔细胞培养板中进行。 
    2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞；细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定）。 
    3. 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物； 
    4．培养结束后，每孔加入20微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育3－6小时；   
    5．孵育结束后，每孔加入100微升Formanzan溶解液，在37℃细胞培养箱内再继续孵育，直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会略长。  
    6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片， 560-600nm范围的滤光片均可使用。

MTT检测试剂盒 使用注意事项
1． 微量试剂取用前请离心集液。
2． Annexin V-EGFP，Propidium Iodide（PI）避光保存及使用。
3． Propidium Iodide （PI）有毒，操作时请戴手套。
4． 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5． 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
6． 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7． 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
MAPK14 ELISA Kit    腺苷酸激酶抗体    人 IL1R2 / IL1RB / CD121b ELISA配对抗体
FFA ELISA Kit    α2巨球蛋白样蛋白1抗体 α2ML1    人 IL17RA / CD217 ELISA配对抗体
FEP ELISA Kit    细胞凋亡相关蛋白3抗体    人 Apolipoprotein H / APOH ELISA配对抗体
f-Hb ELISA Kit    肌动蛋白α/α-SMA/α Actin抗体    人 CD40 / TNFRSF5 ELISA配对抗体
Free-T3 ELISA Kit    ATP结合蛋白家族7抗体    人 CD36 / SCARB3 / GPIV ELISA配对抗体
Free Carnitine ELISA Kit    ASCL2蛋白抗体    人 KLK11 / Kallikrein-11 ELISA配对抗体
fPSA ELISA Kit    磷酸化脊髓小脑失调症蛋白1抗体    人 CD97 ELISA配对抗体
FT4 ELISA Kit    磷酸化活化转录因子1抗体    人 TrkC / NTRK3 ELISA配对抗体
F-TESTO ELISA Kit    磷酸化活化复制因子2抗体    乙型流感 血凝素 (Hemagglutinin / HA) ELISA配对抗体
FP-S ELISA Kit    磷酸化活化复制因子2抗体    甲型流感 H7N7 血凝素 (Hemagglutinin / HA) ELISA配对抗体
FE3 ELISA Kit    磷酸化活化复制因子2抗体    人 SPARCL1 / SPARC-like 1 ELISA配对抗体
f-βhCG ELISA Kit    磷酸化活化复制因子2抗体    人 IL1RL1 / DER4 ELISA配对抗体
Hp-IgG ELISA Kit    磷酸化活化复制因子2抗体    人 IL13RA1 / CD213a1 ELISA配对抗体
Hp-IgM ELISA Kit    磷酸化活化复制因子2抗体    人 CD31 / PECAM-1 ELISA配对抗体
HP-CagA-IgG ELISA Kit    活化转录因子5抗体    人 TNF-alpha / TNFA / TNFSF2 ELISA配对抗体
EL ELISA Kit    活化转录因子6β抗体    人 Trk-B / NTRK2 ELISA配对抗体
SOST ELISA Kit    AICAR甲酰基转移酶抗体    人 Layilin / LAYN ELISA配对抗体
IHH ELISA Kit    磷酸化毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白抗体    人 IL10RB / CRFB4 ELISA配对抗体
NLRP3/C1orf7/CIAS1/NALP3/PYPAF1 ELISA Kit    ATP5E蛋白抗体    人 RBP4 / PRBP ELISA配对抗体
IDO ELISA Kit    ATP5G2蛋白抗体    人 IL12B / NKSF2 / p40 ELISA配对抗体
Shh-N ELISA Kit    ATP6V0D2蛋白抗体    人 Fetuin-A / AHSG / FETUA ELISA配对抗体
SHH ELISA Kit    ATP6V1B2蛋白抗体    人 IL1R1 / CD121a ELISA配对抗体
Inhbb ELISA Kit    ATPIF1蛋白抗体    人 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 ELISA配对抗体
INHBA ELISA Kit    Attractin蛋白抗体    人 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 ELISA配对抗体
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