ATCC CRL-2408(NK-92MI)细胞

细胞名称:    ATCC CRL-2408(NK-92MI)细胞,NK-92MI细胞,NK92MI细胞,人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞
种属来源:    人
组织来源:    淋巴
疾病特征:    淋巴瘤
细胞形态:    淋巴母细胞样
生长特性:    悬浮生长
培养基:        MEM培养基(MEM，GIBCO，90%；FBS，10%。
生长条件:    气相：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37 ℃, 
传代方法:    1：2至1：6，每周2次。
冻存条件:    90% 完全培养基+10% DMSO，液氮储存
支原体检测:    阴性
安全等级:    2

STR:    
D5S818: 12. 13
D13S317: 9, 12
D7S820: 10, 11
D16S539: 11, 12
vWA: 16, 18
THO1: 6, 9.3
TPOX: 8
CSF1PO: 11, 12
Amelogenin: X, Y

参考文献:    
Gong JH, et al. Characterization of a human cell line (NK-92) with phenotypical and functional characteristics of activated natural killer cells. Leukemia 8: 652-658, 1994. PubMed: 8152260
 
Tam YK, et al. Characterization of genetically altered, interleukin 2-independent natural killer cell lines suitable for adoptive cellular immunotherapy. Hum. Gene Ther. 10: 1359-1373, 1999. PubMed: 10365666
 
Tam YK, et al. Immunotherapy of malignant melanoma in a SCID mouse model using the highly cytotoxic natural killer cell line NK-92. J. Hematother. 8: 281-290, 1999. PubMed: 10417052
 
特点和简介
NK-92是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株白细胞介素-2依赖型NK细胞株。 NK-92MI是转染得到的源自NK-92的IL-2非依赖的NK细胞株。 亲本细胞通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2 cDNA进行转化。 可能由于载体整合到基因组DNA中，转化是稳定的。 这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562和Daudi细胞。 NK-92细胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面标记阳性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34和HLA-DR表面标记阴性。其亲本IL-2依赖的细胞株CRL-2407(NK92)及另一株同样来源于NK-92细胞株的IL-2非依赖的细胞株CRL-2409(NK-92CI)都可从ATCC得到。NK-92MI 和 NK-92CI这两个变种都包含、表达并合成hIL-2 cDNA。 NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而亲本细胞不合成表达。 1998年九月提交到ATCC的培养物污染了支原体。 其后代通过BM 细胞周期蛋白处理21天消除支原体。 处理后六周，用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测。 结果都呈阴性。

接受后处理
1) 收到细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们。

2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3) 弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基。

4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

5) 接到细胞次日，请检查ATCC CRL-2408(NK-92MI)细胞,NK-92MI细胞,NK92MI细胞,人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞是 否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及 时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子 等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细 胞汇 合度80%左右时正常传代。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术 部 沟通交流。由于ATCC CRL-2408(NK-92MI)细胞,NK-92MI细胞,NK92MI细胞,人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7.该细胞仅供科研使用。