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- 上海研生
- YS-C3656
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- 2025年07月08日
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- 供应商：
上海研生
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58
- 英文名：
详见说明书
资源名称 U251
种属 人神经胶质细胞瘤细胞
形态 多角
培养方法
培养基 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle＇sBalancedSalts)10%FBS
传代方法 1:3传代；3~4天1次。
生长特性 贴壁生长
存储条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
详细说明
传代情况 C5
支原体检测 培养法（-）
STR AmelogeninX；CSF1PO11,12；D13S31710,11；D16S53912；D18S5113；D19S
运输和保存：
U251视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。
培养细胞冻存方案：
U251以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低 1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
HPLC≥98%Wnt-3a蛋白检测试盒100mgAFB1-DNA
HPLC≥98%Alpha-D 生育/维生E检测试盒5mgFOLR
HisX6英文名称：ZNF312法尼基二磷合酶1抗体
HPLC≥98%v-rel禽网状内皮细胞过多症病癌因同源物B检测试盒100mgAFP1
HPLC≥98%alpha-1肾上能受体检测试盒5mgGSTM1
HIV gp120英文名称：ZNF268鸟嘌呤核苷结合蛋白1抗体
麦角林进口/国产RPL5 核糖体蛋白L5体含量测定
HPLC≥98%AFG3样蛋白2检测试盒5mgACC
HSP-60( Heat shock protein-60)英文名称：ZNF268胶质纤维性蛋白GFAPδ抗体
U251高端化学,合成试, 钨钠
BR，300u-500/mg98%10gGalDH
TIMP-2英文名称：RRAD自身抗原EDC4抗体
定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 Radix morindae officinalis巴戟天染料法PCR鉴定试剂盒 负20度 一年 2-4周 低温
定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 Semen lablab album白扁豆染料法PCR鉴定试剂盒 负20度 一年 2-4周 低温
定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 Radix stemonae百部染料法PCR鉴定试剂盒 负20度 一年 2-4周 低温
定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 Rhizoma typhonii白附子染料法PCR鉴定试剂盒 负20度 一年 2-4周 低温
定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 Semen ginkgo白果染料法PCR鉴定试剂盒 负20度 一年 2-4周 低温
定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 Bulbus lilii百合染料法PCR鉴定试剂盒 负20度 一年 2-4周 低温
定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 Rhizoma bletillae白及染料法PCR鉴定试剂盒 负20度 一年 2-4周 低温
定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 Radix ampelopsis白蔹染料法PCR鉴定试剂盒 负20度 一年 2-4周 低温
定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 Rhizoma imperatae白茅根染料法PCR鉴定试剂盒 负20度 一年 2-4周 低温
定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 Rhizoma cynanchi stauntonii白前染料法PCR鉴定试剂盒 负20度 一年 2-4周 低温
定做种属检测试剂盒/中药材鉴定试剂盒 50次 Radix paeoniae alba白芍染料法PCR鉴定试剂盒 负20度 一年 2-4周 低温高端化学,固相合成, 2,6-二 97%50TArg
进口、国产84696-11-71g
TNFRSF19英文名称：Runx3E3泛素蛋白连接酶EDD抗体
97%50TAPX
进口、国产97281-15-71g
TNFSF9英文名称：Rad51胚胎外胚层发育蛋白EED抗体
具体操作：
1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液：大鼠主动脉平滑肌细胞取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。
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问：手上有U251细胞，pEGFP载体，现在将不带外源基因的载体转u251的效率都很低，10%都没有。所用转染试剂：invitrogen的Lipofectamine 2000和威格拉斯的Vigofect，效率都很低，试过不同细胞密度，不同的DNA和转染试剂的比值，还是不行。各位高人有没有什么建议，另外转染的时候使用有血清的培养基养细胞，不知道影响大不大（说明书上说没有影响），稀释DNA和转染试剂是无血清的培养基，还有就是细胞是很久以前的了，传代较多不知道行不行。答：lipo最好
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