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- 2025年11月07日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃&-80℃
- 保质期：
3个月~12个月
- 英文名：
pECMV-3×FLAG-NLRP3(1同义突变)质粒
- 库存：
41
- 供应商：
上海禾午生物科技有限公司
- 规格：
2ug冻干粉&300ul甘油菌
pECMV-3×FLAG-NLRP3（1同义突变）人源基因质粒 货号：P9589质粒干粉操作说明： 规格：2ug 保质期：3个月 保存温度：-20℃ 使用说明 1、收到质粒干粉后请5000rpm离心1min ，再加入20ul ddH2O溶解质粒 2、取2ul质粒转化至100ul感受态中，冰浴30min后,42℃热激90s，再冰浴2min 3、加入液体培养基，180rpm震荡培养45min, 离心全涂至LB固体平板上 4、将涂好的平板正向放置于培养箱37℃培养1-2h，再倒置培养12~16h 5、挑取平板上的单克隆菌落至LB液体培养基，37℃摇震荡培养12~16h根据实验提取质粒 6、暂时不使用可先放置于-20℃保存，TE缓冲液中-80℃的DNA更佳 本公司提供质粒仅供科研使用，不能用于临床试验，包括人体口服，注射或者体外用药 感谢您关注我们禾午生物，收到质粒如有任何问题可咨询021-57886085 或官网客服 QQ：570992151，我们将竭诚为您服务 ，期待与您的再次合作
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文献和实验相关实验
"把基因表达量调高"听起来是个简单需求，但用 CRISPRa 和用 cDNA 过表达质粒，得到的细胞模型和结论都可能完全不同。选错的话，表型实验从一开始就偏了。 先说结论：过表达质粒是在细胞质里额外生产一份蛋白，表达量远高于生理水平、不考虑 isoform 和调控背景、也无法保证定位正确；CRISPRa 是在内源基因组位点上激活转录，产物是天然的剪接 isoform、受内源调控元件约束、表达量更接近生理范围。想问"这个基因多了会怎样"用过表达，想问"把这个基因的内源表达调高
的"破坏"不同，KI 做的是"精确写入"，因此效率更低、验证更严、周期更长（通常 8~10 周起）。 方案确认顺序： 敲入位点与形式（标签/点突变/报告基因） → 供体设计 → sgRNA 与活性验证 → 编辑与富集 → 单克隆 → 基因型验证 --- 一、KI 能做什么？三种典型应用 应用 内容 典型用途 内源标签敲入 在内源基因 C 端/N 端插入 GFP、Flag、HA 等 在内源表达水平下观察蛋白定位、互作 点突变敲入 引入特定碱基变化（如激活/抗药/致病突变） 精确模拟
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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