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- 2025年11月07日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃&-80℃
- 保质期：
3个月~12个月
- 英文名：
pECMV-3×FLAG-ATP5PO质粒
- 库存：
41
- 供应商：
上海禾午生物科技有限公司
- 规格：
2ug冻干粉&300ul甘油菌
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文献和实验的"破坏"不同，KI 做的是"精确写入"，因此效率更低、验证更严、周期更长（通常 8~10 周起）。 方案确认顺序： 敲入位点与形式（标签/点突变/报告基因） → 供体设计 → sgRNA 与活性验证 → 编辑与富集 → 单克隆 → 基因型验证 --- 一、KI 能做什么？三种典型应用 应用 内容 典型用途 内源标签敲入 在内源基因 C 端/N 端插入 GFP、Flag、HA 等 在内源表达水平下观察蛋白定位、互作 点突变敲入 引入特定碱基变化（如激活/抗药/致病突变） 精确模拟
4 %SDS 0.2 % 溴酚蓝 20 % 甘油 三、实验方案 1、外源基因的诱导表达 (1 ）用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA 和目的基因。 (2 ）按连接步骤连接目的基因和载体，并转化到相应的宿主菌。 (3 ）筛选出含重组子的转化菌落，提取质粒DNA 作限制性内切核酸酶图谱，DNA 序列测定， 确定无误后进行下一步。 (4 ）如果表达载体的原核启动子为PL 启动子，则在30 -32 ℃ 培养数小时，使培养液的OD600达0.4-0.6 ，迅速使温度升至42 ℃ 继续
的有温度诱导和药物诱导。本实验采用异丙基硫代-β-D-半乳糖昔(IPTG)诱导外源基因表达。 不同的表达质粒 表达方法并不完全相同，因启动子不同，诱导表达要根据具体情况而定。 二、材料 1、诱导表达材料 (1 )LB (Luria—Bertani))培养基 酵母膏 (Yeast extract)5g 蛋白胨 (Peptone)10g NaCl10g 琼脂 (Agar)1-2% 蒸馏水 (Distilled
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