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- 2025年11月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃&-80℃
- 保质期：
3个月~12个月
- 英文名：
pCMV-SPORT6-GAPDH质粒
- 库存：
41
- 供应商：
上海禾午生物科技有限公司
- 规格：
2ug冻干粉&300ul甘油菌
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文献和实验memoday 最近在做一个信号通路的下游磷酸化水平检测，但是做western没有看到任何条带,包括p-ERK,p85。麻烦各位战友帮我分析一下可能原因吧： 1.293T细胞转染质粒（带外源基因），24h 2.无血清培养18h 3.配体（外源基因是该配体的膜受体）激活，37度，10min 4.PLB（promega公司）裂解细胞，做western，抗体是SANTA CRUZ公司的p-ERK (Tyr 204)，以及cell
），绿色荧光蛋白（GFP），荧光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）。可以使用简单的非同位素方法检测b-gal的表达以测定转染效率和活性。pCMV SPORT- bgal质粒包含CMV启动子调控下的LacZ基因，转染入真核细胞内后可以直接表达bgal。结合简单的检测步骤，可以做为监测转染条件的一种方便灵敏的方法。 09稳定转染细胞系的筛选 用载体中所含的选择标志进行筛选是建立稳定转染细胞系最常用的方法。抗生素抗性基因可以与目的基因在同一个质粒上，也可以在不同的质粒上。如果两个不同
的结果。这表明 RNase III 能够消化各种来源的双链RNA 。验证 RNaseIII 降解产物诱导基因沉默的能力GAPDH 和La 在Hela细胞中的丰度高，也比较容易检测内源基因的表达水平。将RNaseIII降解GAPDH 和La 得到的siRNA s 库转入Hela 细胞，用免疫荧光法检测其诱导基因沉默的能力。根据所检测的细胞数量对荧光信号进行平衡化和定量。但是内源的c-FOS 在293细胞中的丰度较低，表达水平下调后就难以检测，为了做同样的验证，实验采用50nM 佛波脂 phorbol
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