ATCC CCL-75(WI-38)人胚肺细胞

细胞名称:    ATCC CCL-75(WI-38)人胚肺细胞
种属来源:    人
组织来源:    肺
疾病特征:    正常
细胞形态:    成纤维细胞样
生长特性:    贴壁生长
培 养 基:    MEM培养基，90%；FBS，10%。
生长条件:    气相：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37  ℃, 
传代方法:    1：2至1：6，每周2次。
冻存条件:    90% 完全培养基+10% DMSO，液氮储存
支原体检测:    阴性
安全等级:    1
应    用:    该细胞系是一个合适的转染宿主。
该细胞系可用于viruscide测试。

STR:    
Amelogenin: X
CSF1PO: 10,12
D13S317: 11
D16S539: 11,12
D5S818: 10
D7S820: 9,11
THO1: 8,9.3
TPOX: 8
vWA: 19,20

同工酶:    
G6PD, B
 
备注:    
Nucleotide (GenBank) : AA762049 EST01 Human Lung cDNA Library Homo sapiens cDNA clone 3I35 5', mRNA sequence.
 
参考文献:    
Sugarman BJ, et al. Recombinant human tumor necrosis factor-alpha: effects on proliferation of normal and transformed cells in vitro. Science 230: 943-945, 1985. PubMed: 3933111
 
Hayflick L, Moorhead PS. The serial cultivation of human diploid cell strains. Exp. Cell Res. 25: 585-621, 1961. PubMed: 13905659
 
Hayflick L. The limited in vitro lifetime of human diploid cell strains. Exp. Cell Res. 37: 614-636, 1965. PubMed: 14315085
 
Hayflick L, et al. Preparation of poliovirus vaccines in a human fetal diploid cell strain. Am. J. Hyg. 75: 240-258, 1962. PubMed: 13905660
 
First International Conference on Vaccines against Viral and Rickettsial Diseases of Man. Pan Am. Health Organ. Off. Doc. 147: 581, 1967.
 
Tomasek JJ, et al. Gelatinase A activation Is regulated by the organization of the polymerized actin cytoskeleton. J. Biol. Chem. 272: 7482-7487, 1997. PubMed: 9054450

特点和简介
WI-38人二倍体细胞系来自妊娠3个月的正常胚胎肺组织。 该细胞系是首株用于人类疫苗制备的人二倍体细胞系。 培液中添加TNF alpha可以促进细胞生长。 在本库通过支原体检测。 在本库通过STR检测。

接受后处理
1)  收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
 
2)  请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
 
3)  弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基。
 
4)  如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
 
5)  接到细胞次日，请检查 ATCC CCL-75(WI-38)人胚肺细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
 
培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
 
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
 
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
 
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消 化。
     
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
 
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
 
3）细胞冻存：待细胞生长状态良时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
 
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
 
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做标识。
 
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储 存。记录冻存管位置以便下次拿取。

培养注意事项
1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及时和我们联系。
 
2.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。

3.用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
 
4.静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细 胞汇合度  80%左右时正常传代。
 
5.请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞 传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
 
6.建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 我司技术 部沟通交流。由于 ATCC CCL-75(WI-38)人胚肺细胞运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 

7.该细胞仅供科研使用。