ATCC CCL-22(MDBK)牛肾细胞

细胞名称:     ATCC CCL-22(MDBK)牛肾细胞, MDBK细胞,

种属来源:     牛

组织来源:     肾

疾病特征:     正常

细胞形态:     上皮细胞样

生长特性:     贴壁生长

培 养 基:     RPMI-1640，90%；FBS，10%。

生长条件:     气相：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37  ℃,

传代方法:     1：2至1：6，每周2次。

冻存条件:     90% 完全培养基+10% DMSO，液氮储存

支原体检测:     阴性

安全等级:     2

应    用:     该细胞可以作为转染宿主细胞。

备    注:
Nucleotide (GenBank) : AF025996 Bos taurus supervillin mRNA, complete cds.
Nucleotide (GenBank) : U64997 Bos taurus ribonuclease K6 gene, partial cds.
Nucleotide (GenBank) : NC_002531 Alcelaphine herpesvirus 1, complete genome.
Nucleotide (GenBank) : AJ238405 Bos taurus mRNA for elongation factor 1 alpha.
Nucleotide (GenBank) : J05217 Bovine beta-1->4-galactosyltransferase mRNA, 5' end.
Nucleotide (GenBank) : AF005370 Alcelaphine herpesvirus 1 L-DNA, complete sequence.

参考文献:
Madin SH, Darby NB Jr.. Established kidney cell lines of normal adult bovine and ovine origin. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 98: 574-576, 1958. PubMed: 13567776
Bolin SR, et al. Survey of cell lines in the American Type Culture Collection for bovine viral diarrhea virus. J. Virol. Methods 48: 211-221, 1994. PubMed: 7989438
Loffler S, et al. CD9, a tetraspan transmembrane protein, renders cells susceptible to canine distemper virus. J. Virol. 71: 42-49, 1997. PubMed: 8985321
Russell DW, Miller AD. Foamy virus vectors. J. Virol. 70: 217-222, 1996. PubMed: 8523528
USEPA Manual of Methods for Virology - EPA publication. Washington, DC:Environmental Protection Agency;EPA EPA 600/4-84/013 (R9), 2001

特点和简介
1957年２月18日，S.H. Madin和N.B. Darby从一只表观正常的成年牛肾脏建立了MDBK细胞株。1973年这株MDBK细胞被牛病毒性痢疾病毒(BVDV)感染。 1982年发现了一株未被BVDV感染的MDBK细胞株。 这株细胞初来自ATCC 1967年７月第96代的冻存管。 这株MDBK细胞的后代经NVSL检测，未发现被任何病毒污染的证据。 1982年８月，R.A. Van Deusen将其提供给ATCC时，已传代至第110代。 这株细胞未被BVDV感染。 在本库通过支原体检测。

ATCC CCL-22(MDBK)牛肾细胞接受后处理
1) 收到细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们。
2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3) 弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基。
4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养 基。
5) 接到细胞次日，请检查细胞是 否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联 系。

培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基 混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有 细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜） 。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作 台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后， 加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清 和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液 ，注意冻 存管做标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记 录冻存管位置以便下次拿取。

ATCC CCL-22(MDBK)牛肾细胞培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生 请及 时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞 因子 等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担 。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞 仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再 次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免 费寄送一次。
4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细 胞汇 合度  80%左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞 传代时 可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 我司技 术 部 沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞 的具体情况，以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。