ATCC HTB-96(U-2 OS)人骨肉瘤细胞

细胞名称:        ATCC HTB-96(U-2 OS)人骨肉瘤细胞
种属来源:        人
组织来源:        骨
疾病特征:        骨肉瘤
细胞形态:        上皮细胞样
生长特性:        贴壁生长
培 养 基:        RPMI-1640，85%；FBS，5%；热灭活马血清，10%。
生长条件:        气相：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37  ℃,
传代方法:        1：2至1：6，每周2次。
冻存条件:        90% 完全培养基+10% DMSO，液氮储存
支原体检测:        阴性
安全等级:        1
应    用:        该ATCC HTB-96(U-2 OS)人骨肉瘤细胞可以作为转染宿主细胞。
STR:
Amelogenin: X
CSF1PO: 13
D13S317: 13
D16S539: 11,12
D5S818: 11
D7S820: 11,12
THO1: 6,9.3
TPOX: 11,12
vWA: 14,18
同工酶:
AK-1, 1
ES-D, 1
G6PD, B
GLO-I, 2
PGM1, 2
PGM3, 1
参考文献:
Heldin CH, et al. A human osteosarcoma cell line secretes a growth factor structurally related to a homodimer of PDGF A-chains. Nature 319: 511-514, 1986. PubMed: 3456080
Ponten J, Saksela E. Two established in vitro cell lines from human mesenchymal tumours. Int. J. Cancer 2: 434-447, 1967. PubMed: 6081590
Raile K, et al. Human osteosarcoma (U-2 OS) cells express both insulin-like growth factor-I (IGF-I) receptors and insulin-like growth factor-II/mannose-6- phosphate (IGF-II/M6P) receptors and synthesize IGF-II: autocrine growth stimulation by IGF-II via the IGF-I receptor. J. Cell. Physiol. 159 : 531-541 , 1994. PubMed: 8188767
Landers JE, et al. Translational enhancement of mdm2 oncogene expression in human tumor cells containing a stabilized wild-type p53 protein. Cancer Res. 57: 3562-3568, 1997. PubMed: 9270029
Moradpour D, et al. Characterization of cell lines allowing titghtly regulated expression of heapatitis C virus core protein. Virology 222: 51-63, 1996. PubMed: 8806487

特点和简介
J. Ponten and E. 这株细胞(原名2T)源自15岁女孩的胫骨中等分化的肉瘤。 与WI-38共培养或CF检测SV40，RSV或腺病毒时未检测到病毒。 1972年发现支原体污染并去除。 在本库通过支原体检测。 在本库通过STR检测。

接受后处理
1) 收到细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们。
2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态，ATCC HTB-96(U-2 OS)人骨肉瘤细胞去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3) 弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基。
4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养 基。
5) 接到细胞次日，请检查细胞是 否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联 系。

培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然 后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养 过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。        
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶 中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落 ，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中 或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞， 根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻 存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时 以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述 现 象发生请及 时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、 所 需细胞因子 等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户 自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细 胞会有少量 从瓶 壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴 壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜 培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为 您再免费寄送一次。
4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培 养，待细 胞汇 合度  80%左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细 胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使ATCC HTB-96(U-2 OS)人骨肉瘤细胞逐渐适应培养条件。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术 部 沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系 ，告知细胞的具体情况，以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。