Western及IP细胞裂解液

产品简介：
 1.      Western及IP细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)，是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
 2.      Western及IP细胞裂解液的主要成分为EDTA   以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，Na3VO4，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。
 3.      用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用方法:
对于培养细胞样品：
 1. 取适当量的Western及IP细胞裂解液混匀，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
 2. 对于贴壁细胞，去除培养液用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。轻轻的摇晃约5-10分钟。充分裂解后，10000-14000g离心10分钟，取上清，即可进行后续操作。
裂解液用量说明： 用于不同规格标准培养板裂解液容量

板规格/表面积	试剂容量
100mm	500-1000μι
60mm	250-500μι
6-well plate	200-400μιper well
24-well plate	100-200μιper well
96-well plate	50-100μιper well

 3. 对于悬浮细胞，离心收集细胞，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适量裂解液用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹或旋涡震荡5-10分钟以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g离心10分钟，取上清，即可进行后续操作。
 对于组织样品：
 1.手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，以清洁表面的血迹，将组织称量后切成几个较小的组织块放入组织匀浆器中。
 2. 取适当量的Western及IP细胞裂解液混匀，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
 3. 按组织净重（g）：裂解液(ml)=1：10的比例，加入相应体积的裂解液进行匀浆(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液 如果需要高浓度的蛋白样品 可以适当减少裂解液的用量) 。
 4.  用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解。
 5.  充分裂解后10000-14000g离心3- 5分钟取上清即可进行后续作。
 注意事项：
 1.     抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。建议将样品分装成合适的量，然后冷冻干燥或直接以液体状态置-20℃中保存，不要反复冻融。
 2.     需自备PMSF。建议在临用前数分钟内加入PMSF使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF(WB0114)可以向我公司订购。
3.     为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。