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溶藻弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

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  • ¥1966
  • 钰博生物/YBscience
  • YB012022
  • 中国/上海
  • 2025年07月07日
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      溶藻弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

    • 保质期

      12 个月

    • 供应商

      上海钰博生物科技有限公司

    • 保存条件

      -20℃条件下保存,有效期1年

    • 规格

    溶藻弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
    产品细节图片1
    溶藻弧菌核酸检测试剂盒(一管式恒温荧光法)
    ◆ 产品说明
    动物疫病检测系列基于独特的恒温荧光检测技术,可针对食品、动物组织等样品中病原的特异核酸片段进行扩增,通过实时扩增曲线判定结果。本产品用于溶藻弧菌的检测,检出限为 103copies/μl 基因组 DNA。
    ◆ 产品组成(48 测试)
    试剂 含量
    A-VA-I 22μL× 48 管
    B-I 90μL × 1 支
    PG-VA-I 50μL × 1 支
    ◆ 适用仪器
    Dhelix-C、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308C 等恒温荧光检测仪,ABI 7500,LightCycler480,CFX 96 等荧光 PCR 仪。
    ◆ 自备耗材和仪器
    ①灭菌 1.5mL 或 2.0mL 离心管;②冰盒;③移液器(0.1-2.5μL,0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;④离心机;⑤涡旋混匀器;⑥金属浴
    ◆ 注意事项
    1.本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。
     1)第一区:样本制备区。
    2)第二区:模板添加区。
     3)第三区:扩增及产物分析区。
    ★分区之间最好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。
    2.实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。
    3.严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
    4.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心 30秒。
    5.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。
    6.不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。
    ◆ 样品处理
    参照下述方法处理样品。
    (1)若对样本不增菌直接进行检测,则取患病动物的病灶组织做匀浆备用。
    (2)若对样本中细菌进行增菌检测,则取待检测样品,以无菌操作取检样 25 g(mL),2%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB)225mL,用旋转刀片式均质器以 8000rpm/min 均质 1 min,或者拍击式均质器拍击 2 min,制备成 1:10 的均匀稀释液。如无均质器,则将 25g 样品放入无菌乳钵中磨碎,然后放在 500 mL 的灭菌容器内,加225 mL 2%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB),并充分振荡后于 30℃培养 6h~16h。
    详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
    ◆ 实验操作
    1. 模板制备(样本制备区)
    请于-20℃条件下保存,有效期 12 个月
    参照水生动物病害基因组 DNA 快速提取试剂盒说明书的提取步骤。
    2.添加模板(模板添加区,放置于冰盒中进行)
    取出所需测试数的已含有反应液 A-VA-I 的 PCR 管,将试剂完全解冻,离心 30 秒,在管盖上标记管名(阴性对照管 NG、样品 XX、阳性对照管 PG)。打开管盖向各管管底分别加入 1μL B-I,盖上阴性对照管管盖,其他各管分别沿管壁加入 2μL 模板,顺序为待测样品模板、PG-VA-I,依次盖好各管管盖,离心 30 秒,立即进行扩增反应。
    3. 扩增反应(扩增及产物分析区)
    ①恒温仪器 63℃条件下反应 60 min。待仪器升温至 63℃后,新建程序,设置实验名称及反应时间,将步骤 2 中离心后的 PCR 反应管放入恒温荧光分子检测仪,点击开始检测。
    ②若使用荧光定量 PCR 仪,则荧光基团选择 FAM,淬灭基团选择 None,将 63℃ 15 s,63℃ 45 s 作为一个循环,于 63℃ 45 s 处收集荧光信号,60 个循环。
    若使用其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
    ◆ 结果判定
    ①恒温仪器自动判定结果,若显示“阳性”,则样品中含有溶藻弧菌;若显示“阴性”,且没有出现 S 型扩增曲线,则样品中不含有溶藻弧菌或含量低于检测限。
    ②在荧光定量 PCR 仪上,根据有无“S”型扩增曲线判定结果。若有“S”型扩增曲线,则样品中含有溶藻弧菌;若无“S”型扩增曲线,则样品中不含有溶藻弧菌或含量低于检测限。
    ★ NG 反应管结果显示“阴性”,PG 反应管结果显示“阳性”,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持人员联系。

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