- ¥680 - 2680
- 沪震生物/HZbscience
- HZ-1030F
- 进口/国产
- 2025年07月11日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
LBA4404 Electroporation-Competent Cell
- 保质期：
-80℃（6个月）
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 保存条件：
-80℃（6个月）
LBA4404 Electroporation-Competent Cell 产品说明书
产品规格
LBA4404 Elec： 50μl/支
pCAMBIA2301（control vector，10ng/μl ) 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（12个月）
基因型
Ach5 (rifR) Ti pAL4404 (strepR) Octopine
产品说明
LBA4404菌株为Ach5型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404，此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。 pAL4404型Ti质粒含有筛选标签：strep，赋予LBA4404菌株链霉素抗性，适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作。唯地生物开发的LBA4404电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pCAMBIA2301质粒 (size:11633 bp)检测转化效率>105 cfu/μg DNA；经pCAMBIA2301-ZH质粒 (size:40 kd)检测转化效率可达103 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入0.01-1 μg质粒DNA（体积不大于6ul，感受态转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。
3. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。
4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天
（当平板只含有50 μg/ml kan 时，28℃培养48 h即可；平板中同时加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 时，需28℃培养60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90 h）。
备注
1、农杆菌相关抗生素配方：
| 抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
| 羧苄青霉素（carb） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
| 硫酸卡那霉素（kan） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
| 链霉素（strep） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 10 mg/ml | 50 μg/ml |
| 利福平（rif） | DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 10 mg/ml | 20 μg/ml |
| 庆大霉素（gent） | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 20 mg/ml | 40 μg/ml |
2、常用农杆菌抗性：（R：抗；S：敏感。）
| 农杆菌菌株 | 羧苄青霉素(carb) | 链霉素(strep) | 利福平(rif) | 庆大霉素(gent) | 硫酸卡那霉素(kan) |
| AGL-1 | R | S | R | S | S |
| EHA101 | S | S | R | S | R |
| EHA105 | S | S | R | S | S |
| LBA4404 | S | R | R | S | S |
| GV3101 | S | S | R | R | S |
| component | LB(液体)/L | LB(固体)/L | component | YEB(液体)/L | YEB(固体)/L |
| Tryptone | 10 g | 10 g | Tryptone | 5 g | 5 g |
| Yeast extract | 5 g | 5 g | Yeast extract | 1 g | 1 g |
| NaCl | 10 g | 10 g | 牛肉浸膏 | 5 g | 5 g |
| NaOH | 调PH到7.0 | 调PH到7.0 | 蔗糖 | 5 g | 5 g |
| Agar | － | 15 g | MgSO4*7H2O | 0.49 g | 0.49 g |
| NaOH | 调PH到7.0 | 调PH到7.0 | |||
| Agar | － | 15 g |
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4. 利福平浓度不应高于25 μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml kan，若所用平板含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验Electro-Transformation of Yeast电转酵母【Upstate Medical University】
Amberg Lab ,Upstate Medical University1.Grow cells to 1X10E8 or OD600 of 1.2-1.3.2.Spin cells at 5,000rpm for 5 min, and wash pellets in an equal volume of ice cold water.3.Wash in 1/2 volume cold water.4.Wash in 1/25 volume ice-cold 1M. sorbitol
试剂准备： LB培养基: 500mL 双蒸水：600mL 高压灭菌 预冷 10%甘油：1000mL 预冷 250ml离心杯：高压灭菌 预冷 50mL离心管数个，250mL摇瓶4个，1.5mL EP管 高压灭菌 制备步骤： 1、接种原代菌（DH5α或DH10B），次日挑取单菌落，放入1mL LB培养基中，37℃，300rpm，6 hr
1．电转化感受态细胞的制备 1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照） 2. 37℃，220rpm，培养14-16个小时。 3. 第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。 4. 将菌液在冰上预冷30分钟，随后将菌液分装到500ml 预冷的离心
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
