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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 免疫原:
A DNA sequence encoding the Sudan ebolavirus (strain Gulu) GP (YP_138523.1) (Met1-Arg501) was expressed with a polyhistidine tag at the C-terminus.
- 亚型:
见说明书
- 形态:
液体
- 保存条件:
4℃
- 克隆性:
无
- 标记物:
见说明书
- 适应物种:
EBOV
- 保质期:
12个月
- 抗原来源:
见说明书
- 目录编号:
40094-V08H2L
- 级别:
免疫学
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 宿主:
HEK293 Cells
- 应用范围:
WB
- 浓度:
见说明书
- 靶点:
EBOV-G
- 抗体英文名:
Ebola virus EBOV (subtype Sudan, strain Gulu) GP1 / Glycoprotein HEK293 Cell Lysate (WB positive control)
- 抗体名:
Ebola virus EBOV (subtype Sudan, strain Gulu) GP1 / Glycoprotein HEK293 Cell Lysate (WB positive control)
- 规格:
300 µg
反应种属:EBOV
裂解液靶点:EBOV-G
裂解液应用:WB
裂解液保存条件:Store at 4℃. After re-dissolution, aliquot and store at -80℃.
裂解液产品描述:Human Cell lysate that Ebola virus EBOV (subtype Sudan, strain Gulu) GP1 / Glycoprotein transfected / overexpressed for Western blot (WB) positive control. The whole cell lysate is provided in 1X Sample Buffer (1X modified RIPA buffer+1X SDS loading buffer).
裂解液表达宿主:HEK293 Cells
裂解液制备方法:Cell lysate was prepared by homogenization of the over-expressed cells in ice-cold modified RIPA Lysis Buffer with cocktail of protease inhibitors (Sigma). Cell debris was removed by centrifugation. Protein concentration was determined by Bradford assay (Bio-Rad protein assay, Microplate Standard assay). The cell lysate was boiled for 5 min in 1 x SDS loading buffer (50 mM Tris-HCl pH 6.8, 12.5% glycerol, 1% sodium dodecylsulfate, 0.01% bromophenol blue) containing 5% b-mercaptoethanol, and lyophilized.
裂解液Buffer:Modified RIPA Lysis Buffer: 50 mM Tris-HCl pH 7.4, 150 mM NaCl, 1mM EDTA, 1% Triton X-100, 0.1% SDS, 1% Sodium deoxycholate, 1mM PMSF.
裂解液质控信息:12.5% SDS-PAGE Stained with Coomassie Blue after protein purification.
裂解液使用建议:1. Centrifuge the tube for a few seconds and ensure the pellet at the bottom of the tube. 2. Re-dissolve the pellet using 200μL pure water and boil for 2-5 min.
裂解液稳定性:Samples are stable for up to twelve months from date of receipt.
裂解液使用说明:Western blot (WB): Use at an assay dependent dilution. Other Applications: Not tested. Optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
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文献和实验(5)选择适合做RIP的抗体。 (6)避免RNA结合蛋白的降解。 6. 为什么抗体无法沉淀RIP裂解液中的目标蛋白? 答: (1)先进行IP或者WB,测试抗体可以与目标RBP结合。 (2)另选一个能与抗原其他表位结合的抗体。 (3)尽可能选用密理博RIPAb+抗体。 (4)稀释抗体成浓度梯度,进行IP测试。 (5)4℃过夜孵育抗体与RIP裂解液。 (6)确定抗体类型与Protein A/Protein G匹配。 7. 提取RNA时,蛋白酶K消化不完
蛋白浓度(BCA 法) ① 八个标准孔,按说明书先加 PBS,再加标准蛋白液 ② 目的孔,每孔加 18ulPBS+2ul 目的蛋白 ③ 按说明书配 BCA 工作液,每孔加 200ul ④ 37°放置半小时后测浓度 (4)计算上样量,设计上样顺序 上样体积:上样量/浓度 x 5/4 上样顺序:无处理,对照,处理;体积最好不要相差太大 经验总结: 如何提高蛋白浓度:首先当然是多培养点细胞,多提供点组织啦,其次可以少加点裂解液,裂解时间长点,尽量裂解
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