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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 免疫原:
A DNA sequence encoding the Nucleoprotein (Human betacoronavirus 2c EMC/2012) (AFS88943.1) (Met 1-Asp413) was fused with a polyhistidine tag at the C-terminus.
- 亚型:
见说明书
- 形态:
液体
- 保存条件:
4℃
- 克隆性:
无
- 标记物:
见说明书
- 适应物种:
MERS-CoV
- 保质期:
12个月
- 抗原来源:
见说明书
- 目录编号:
40068-V08BL
- 级别:
免疫学
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 宿主:
Baculovirus-Insect cells
- 应用范围:
WB
- 浓度:
见说明书
- 靶点:
NP-CoV
- 抗体英文名:
MERS-CoV (NCoV / Novel coronavirus) Nucleoprotein / NP Insect Cell Lysate (WB positive control)
- 抗体名:
MERS-CoV (NCoV / Novel coronavirus) Nucleoprotein / NP Insect Cell Lysate (WB positive control)
- 规格:
300 µg
反应种属:MERS-CoV
裂解液靶点:NP-CoV
裂解液应用:WB
裂解液保存条件:Store at 4℃. After re-dissolution, aliquot and store at -80℃.
裂解液产品描述:Baculovirus-Insect Cell lysate that Novel coronavirus (HCoV-EMC/2012) Nucleoprotein / NP transfected / overexpressed for Western blot (WB) positive control. The whole cell lysate is provided in 1X Sample Buffer (1X modified RIPA buffer+1X SDS loading buffer).
裂解液表达宿主:Baculovirus-Insect cells
裂解液制备方法:Cell lysate was prepared by homogenization of the over-expressed cells in ice-cold modified RIPA Lysis Buffer with cocktail of protease inhibitors (Sigma). Cell debris was removed by centrifugation. Protein concentration was determined by Bradford assay (Bio-Rad protein assay, Microplate Standard assay). The cell lysate was boiled for 5 min in 1 x SDS loading buffer (50 mM Tris-HCl pH 6.8, 12.5% glycerol, 1% sodium dodecylsulfate, 0.01% bromophenol blue) containing 5% b-mercaptoethanol, and lyophilized.
裂解液Buffer:Modified RIPA Lysis Buffer: 50 mM Tris-HCl pH 7.4, 150 mM NaCl, 1mM EDTA, 1% Triton X-100, 0.1% SDS, 1% Sodium deoxycholate, 1mM PMSF.
裂解液质控信息:12.5% SDS-PAGE Stained with Coomassie Blue after protein purification.
裂解液使用建议:1. Centrifuge the tube for a few seconds and ensure the pellet at the bottom of the tube. 2. Re-dissolve the pellet using 200μL pure water and boil for 2-5 min.
裂解液稳定性:Samples are stable for up to twelve months from date of receipt.
裂解液使用说明:Western blot (WB): Use at an assay dependent dilution. Other Applications: Not tested. Optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
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文献和实验是0.5% NP-40,用于破坏核膜结构;可用到1%,但此时染色体会析出,沉淀粘稠。3、组织块裂解:组织块较大用匀浆的方法最合适,现在有不少转头很小的匀浆器。当组织超微量的时候,比如50mg新鲜癌组织,我采用的方法是(1). 低温(剪)搅碎,成肉糜状。(2). 锡箔纸包裹好,放入少量液氮,快速敲击(控制力量,尽量避免弄破锡箔纸),进一步破碎;反复多次。(3). 用上述细胞裂解液回收。4、分泌型蛋白富集:用无血清培养基培养细胞,收集上清液用于WB检测;如果含量过低,需要用TCA沉淀富集。理论上,从普通培养基中
几倍,而WB灵敏度是以10的几次幂量级的,所有目的蛋白信号的唯一方案就是IP富集(可特异提高目的蛋白浓度数百数千倍,并去除其它杂蛋白干扰)。增加上样量的另一个坏处是,本来高表达的蛋白,诸如内参,在同样WB条件下,可能出现荧光灼烧式粹灭(一晃而灭)或者条带中空。仍以6孔板80%以上汇合度为例,细胞裂解液和SDSLB通常都是投入200ul(最少80ul,这样面积的培养板如果裂解液投入太少,回收时的损失就太大,上样就很难做到一致),而这种浓度条件下制备的样品,电泳时上样量要控制在5-6ul,最少
状态,保证裂解细胞的方式较为温和,便于随后的IP等试验。其他Na盐浓度的细胞裂解液也很常见,诸如0.15M(生理盐浓度)、0.3M、0.6M(高盐系列,裂解细胞时染色体会析出,细胞碎片和沉淀非常粘稠)及0.8-1.2M;0.3M及以下适合IP试验,0.6M及以上适合纯化蛋白,尤其相互作用较强的复合体,要得到纯化的一些复合体的组成蛋白一般采用极端的高盐裂解细胞。 用于核蛋白的裂解的原因是0.5% NP-40,用于破坏核膜结构;可用到1%,但此时染色体会析出,沉淀粘稠。 组织
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