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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 免疫原:
A DNA sequence encoding the human IL7R (AAC83204.1) (Met1-Gly236) was expressed with the Fc region of human IgG1 at the C-terminus.
- 亚型:
见说明书
- 形态:
液体
- 保存条件:
4℃
- 克隆性:
无
- 标记物:
见说明书
- 适应物种:
Human
- 保质期:
12个月
- 抗原来源:
见说明书
- 目录编号:
10975-H02HL
- 级别:
免疫学
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 宿主:
HEK293 Cells
- 应用范围:
WB
- 浓度:
见说明书
- 靶点:
IL7R
- 抗体英文名:
Human CD127 / IL-7RA CHO Cell Lysate (WB positive control)
- 抗体名:
Human CD127 / IL-7RA CHO Cell Lysate (WB positive control)
- 规格:
300 µg
反应种属:Human
裂解液靶点:IL7R
裂解液应用:WB
裂解液保存条件:Store at 4℃. After re-dissolution, aliquot and store at -80℃.
裂解液产品描述:HEK293 Cell Human CD127 / IL-7RA transfected / overexpressed for Western blot (WB) positive control. The whole cell lysate is provided in 1X Sample Buffer (1X modified RIPA buffer+1X SDS loading buffer).
裂解液表达宿主:HEK293 Cells
裂解液制备方法:Cell lysate was prepared by homogenization in ice-cold modified RIPA Lysis Buffer with cocktail of protease inhibitors (Sigma). Cell debris was removed by centrifugation. Protein concentration was determined by Bradford assay (Bio-Rad protein assay, Microplate Standard assay). The cell lysate was boiled for 5 min in 1 x SDS loading buffer (50 mM Tris-HCl pH 6.8, 12.5% glycerol, 1% sodium dodecylsulfate, 0.01% bromophenol blue) containing 5% b-mercaptoethanol, and lyophilized.
裂解液Buffer:Modified RIPA Lysis Buffer: 50 mM Tris-HCl pH 7.4, 150 mM NaCl, 1mM EDTA, 1% Triton X-100, 0.1% SDS, 1% Sodium deoxycholate, 1mM PMSF.
裂解液质控信息:12.5% SDS-PAGE Stained with Coomassie Blue after protein purification.
裂解液使用建议:1. Centrifuge the tube for a few seconds and ensure the pellet at the bottom of the tube. 2. Re-dissolve the pellet using 200μL pure water and boil for 2-5 min. 3. Store the lyophilized cell lysate at 4℃. After re-dissolution, recommend to aliquot it into smaller quantities and store at -80℃.
裂解液稳定性:Samples are stable for up to twelve months from date of receipt.
裂解液使用说明:Western blot (WB): Use at an assay dependent dilution. Other Applications: Not tested.
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文献和实验:这个问题比较宽泛,也没有标准的答案,我们只能结合目前的一些经验说一下。我们义翘神州经过十多年的重组蛋白表达,在细胞、载体及培养基等整体表达体系都进行了优化。经过优化的体系,HEK293 瞬转表达重组蛋白体系的细胞密度要高于 CHO 细胞,所以在蛋白表达量方面,HEK293 瞬转表达的重组蛋白要比 CHO 更好一些。但在蛋白的修饰和活性方面,我们目前还没有发现明显的差异。3. 用合成的 300bp 片段基因,蛋白怎么都表达不出来怎么办?解答:首先需要确定,这段合成的基因片段有没有经过密码子优化?是不是
性进行测定。 内源性GPCR检测灵敏性。我们也使用 A23187 与 S1P,以及 8 点剂量反应曲线检测实验灵敏性(参见图 2)。于 Z 因子测定相同时间点,通过 RTCA 软件计算产生 50% 最大反应(EC50 值)的激活剂浓度。 每种细胞系的 EC50 值见表 2。每种细胞对 A23187 的处理均比较敏感,除CHO-K1外,所有细胞类型对 S1P 的处理均非常敏感,产生的 EC50 值低限为 10-7 至 10-9。尽管 CHO-K1 细胞表达EDG 受体(4),后续检测
基因免疫技术(Gene immunization technique)
5. 免疫小鼠抗体水平的测定 将免疫的小鼠编号,分为载体质粒及重组表达质粒的再次和初次免疫,每隔2周眼球取血一次,共取5次,保存血清。用ELISA方法检测抗体产生情况。观察抗体水平动态变化。 6.表达pCX-EGFP-VP7的质粒DNA与基因工程CHO细胞表达的抗原蛋白免疫原性的比较。 (二)、CHO细胞表达VP7的免疫原性测定 1.经腹腔注射免疫6只4周龄的Balb/C小鼠,大约0.5ml(60ug)VP7抗原与等量佐剂混合用,每间隔14天再免疫两次,于末次
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