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文献和实验,一组使用 NaHS 处理,一组则不作处理;然后用荧光马来酰亚胺染料 Alexa Fluor 488 C5 maleimide(下文简称MAL,Invitrogen,A10254)标记半胱氨酸上的硫醇基团,使正常的半胱氨酸通过 -S- 与 MAL 连接,而硫巯基化的半胱氨酸通过二硫键 -S-S- 与 MAL 连接,如下图: 图 1. 文献 Fig. 6G,硫巯基化分析步骤 接下来加入 DTT,硫巯基化蛋白上特有的二硫键就会被解开,导致荧光 MAL 分子脱落,荧光信号减弱。所以,荧光信号发生变化就验证
琥珀酸辛二酸二亚胺 同源 N-羟基琥珀酰亚胺 -NH2 N 11.4 BMH 马来酰亚胺己烷 同源
问:我手上有一15氨基酸的合成肽,要和BSA耦联,用于制备抗体,想用戊二醛法或用EDC/DCC法,但是我这合成肽中间的9个氨基酸是抗原表位,并且有含羧基的Asp和含氨基地Lys,用戊二醛法或用EDC/DCC法和BSA耦联会不会影响抗原性?还有没有更好的方法?希望各位赐教。答:会影响。戊二醛法或用EDC/DCC法利用的是氨基酸残基的羧和氨基,尤其是赖氨酸的氨基。你的15氨基酸的合成肽内有巯基吗?如果有,可以用含有马来酰亚胺和琥珀酰亚胺的试剂,马来酰亚胺基团和巯基反应后,再和BSA的氨基反应。这种
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