义翘神州 HCV NS2/3 Gene cDNA克隆 表达就绪 C端FLAG标签 丙肝病毒hcv

His-Tag原核表达――Qiagen

什么免疫原性，经多种融合蛋白验证对蛋白的分泌、折叠和结构，甚至功能几乎没影响，可以放在C端或者N端，更重要的是能够高度亲和Ni离子――而固化金属离子亲和层析已经相当成熟。所以融合蛋白纯化方便，HisTag得到越来越广泛应用。Qiagen公司的原核表达产品设计的概念非常明确，所有表达载体都是围绕在纯化中应用最为广泛的组氨酸纯化标签设计的――因为Qiagen公司有纯化6×组氨酸而专门设计的专利产品氮川三乙酸镍（nickel-nitrilotriacetic acid，Ni-NTA）金属亲和层析填料。这种

外源基因在大肠杆菌中的诱导表达和降解物阻遏作用

； 已开发较多的克隆载体可供选择； 容易获得大量的外源蛋白（外源蛋白可占细菌总蛋白50％左右）。 （2）蛋白质在原核细胞中的表达特点： 原核细胞有其固有的RNA聚合酶，识别原核基因的启动子。因此，在用原核细胞表达目的基因（无论是真核基因还是原核基因）时，一般应使用原核启动子。 原核基因的mRNA含有SD序列，启动蛋白质的合成。而在真核基因上则缺乏该序列

去Tag不留痕――NEB原核表达系列

如下：几丁质结合蛋白域―intein1―MCS―Intein2―几丁质结合蛋白。这个巧妙的设计有3重便利：N-端，C-端或者N-端和C-端同时融合短的内含肽序列。想做N端融合，你可以将目的基因替换MCS―Intein2―几丁质结合蛋白，如果想做C端融合表达，就可以将目的基因替换MCS前面的几丁质结合蛋白域―intein1―MCS，不用分2个载体；而且做过克隆的人会很有体会：很多时候双酶切载体，由于2个酶切位点都多克隆位点上，没有小片断切下来，所以是否成功双酶切就不好判断，如果用Twin载体就会切下一个片断