Sino Biological Rat HDAC1L ORF cDNA表达质粒 稳定或瞬时哺乳动物表达 hdac1基因

真相揭秘 | 为什么构建稳定表达细胞株这样难？

别说话 先了解一下 外源基因在细胞中的表达可分为两大类。   一、瞬时表达 瞬时表达外源DNA不整合到宿主染色体中，虽然可以达到高水平表达，但通常只持续几天。瞬时表达所需的人力和时间比稳定表达少，但因为DNA摄入率和表达水平在不同实验中差异较大，不长久也不稳定。   二、稳定表达 稳定表达外源DNA整合到宿主细胞染色体上，或者相当于附加子可持续存在，可使宿主细胞长期表达目的基因。   然而，外源基因整合进宿主染色体上的几率很小，通常发生随机整合，其表达水平和整合位置有关，会

RT-PCR 在基因表达检测中的应用

。 RT-PCR检测基因表达的问题讨论关于 RT-PCR 技术方法的描述参见 PCR 技术应用进展， 在此主要讨论它在应用中的问题。理论上 1μL 细胞质总 RNA 对稀有 mRNA 扩增是足够了（每个细胞有1 个或几个拷贝）。 1μL 差不多相当于 50－100，000个典型哺乳动物细胞的细胞质中所含RNA的数 量，靶分子的数量通常大于50，000，因此扩增是很容易的。该方法所能检测的最低 靶分子的数量可能与通常的 DNA PCR 相同；例如它能检测出单个 RNA 分子。 当已知量的转录

凋亡和细胞周期调控相关基因的应用

了两种生物学复本在不同表达水平范围的表达稳定性。 这测定了该分析在不同表达水平的差异。为此，用管家基因板以及参照样品（siGFP处理的细胞）对（每个用siRNAs靶向BARD1、C19ORF24、GDF3或DONSON处理的样品的）两个复本进行标准化，以推导出各自的相对表达水平（图3）。在全部3个板之间进行分析（体现全部947次重复测定）。这些结果显示了变异系数在0.1-2.5倍表达的范围内非常稳定，大约为10%。 图2: 两个生物学重复之间的相关性。 该描记图显示（a）参照基因检测板，（b