- ￥1770
- Sino Biological
- 北京
- HG17047-NF
- 2026年03月23日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃ to -80℃
- 保质期：
3个月
- 英文名：
Human Acidic mammalian chitinase Gene ORF cDNA clone expression plasmid, N-Flag tag
- 库存：
99
- 供应商：
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格：
1 Unit
基因靶点：CHIA
反应种属：Human
应用说明：Stable or Transient mammalian expression
cDNA描述：Full length Clone DNA of Human chitinase, acidic with N terminal Flag tag.
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文献和实验的"破坏"不同，KI 做的是"精确写入"，因此效率更低、验证更严、周期更长（通常 8~10 周起）。 方案确认顺序： 敲入位点与形式（标签/点突变/报告基因） → 供体设计 → sgRNA 与活性验证 → 编辑与富集 → 单克隆 → 基因型验证 --- 一、KI 能做什么？三种典型应用 应用 内容 典型用途 内源标签敲入 在内源基因 C 端/N 端插入 GFP、Flag、HA 等 在内源表达水平下观察蛋白定位、互作 点突变敲入 引入特定碱基变化（如激活/抗药/致病突变） 精确模拟
会怎样"用 CRISPRa。 --- 一、机制差异决定了两者能回答的问题不同 过表达质粒（cDNA / ORF） 外源启动子（CMV、EF1α 等）驱动，表达量与内源调控完全脱钩； 通常只包含单一 CDS，不含内含子和 UTR； 表达量可达到内源的几十到几百倍； 可携带标签（FLAG、HA、GFP）方便检测。 CRISPRa（dCas9-VP64 / VPR / SAM / SunTag） 失活 Cas9（dCas9）融合转录激活域，被 gRNA 引导至靶基因启动子区； 激活的是内源位点，转录本包含完整的内含
用传统的限制酶切和连接的方法产生入门克隆。这些载体配合合适的目的载体，可以用于表达天然蛋白或带有N端或C端融合标签的重组蛋白。为了在真核细胞中有效地翻译蛋白，所有的5个Gateway入门载体提供了Kozak 序列。此外，pENTR11提供了SD （Shine-Dalgarno）序列，便于在大肠杆菌中有效的翻译。2、PCR重组克隆 重组是从PCR产物创建Gateway入门克隆的另一种方法。这种方法是通过合并attB位点到上游和下游引物上，然后共同孵育PCR扩增产物和pDONR载体（包含attP位点
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