293、转染相关统计

培养条件：DMEM+10FBS
传代：1：4—8  24小时
冻存条件：基础培养基+8%DMSO+20%FBS

常用细胞说明：经一段时间统计，真正养好的不多，后续实验结果大多不是很理想，影响因素：细胞来源身份、试剂、耗材、技术经验。
就以上统计结果我司服务真对这几类用户（工业应用、保种应用、对实验结果要求高的）要求如下：
一年以上培养经验（新同学问题欢迎来电来信），进口试剂耗材，良好的培养环境，对实验耗材与试剂要求高的实验室（这点重复目的是，有些培养体系的条件我们体系不适合）

我司推荐试剂全部经过难养及问题细胞筛选而得，与普通实验室要求能养细胞就行的试剂不是一个水平。后面遇到问题我们可沟通，我司给出的建议方案。试剂筛选其实也是一个实验室的很基本的要求。就这株细胞后续转染慢病毒做下说明，好的试剂使细胞容错率很高，细胞状态很好（惯例可比正规库来源时好很多）细胞数量可控（这点无血清很难办到）在减血清情况维持细胞活性并收毒（这中间还有我们增强细胞贴壁试剂联合应用），病毒在细胞维持阶段感染细胞。一般建议四-五天，细胞系特点不会病变，最重收货效价很高。

图一是我司推荐胰酶消化分离过程中效果图含增强贴壁试剂。特点是：不怕消化过。胰酶化学作用使细胞呈分散状态（无需机械力）。也是我们这项服务较重点项。按这类状态传代后细胞一般两天长满。避免粗暴处理后，细胞呈蜘蛛网状（这类细胞一般一天长满，完全培养基容易变黄，细胞状态不均匀引。
 
图二细胞复苏后状态

欢迎新生同学来信咨询,并把师哥师姐的实验数据拍在沙滩上

外源基因导入动物细胞的常用方法（相关研究老师可来信交流）：
1、磷酸钙共免疫沉淀法，用Ca2+ 沉淀磷酸离子和DNA，沉淀在细胞质膜上的DNA被细胞吸收，可能是通过吞噬作用
2、DEAE-葡聚糖（DEAE-dextron)或聚阳离子（polycation),它能结合DNA并促使细胞吸收：
3、脂质体（liposome)法，利用脂类超声波、机械搅拌等处理，形成双脂层小囊泡，将DNA溶液包裹在内，它通过与细胞膜融合而使DNA进入细胞：
4、脂质转染法（lipofection),用人工合成的阳离子脂类与DNA形成复合性，借助类脂穿过质膜而将DNA导入细胞内。细胞膜随即修复正常。
磷酸钙发成本低，操作方便，但效率低
脂类转染法与电穿孔法，前者需要昂贵的试剂，后者需要专用设备，但效率高。
显微注射法：在显微镜下，用极细的玻璃注射针头（0.1-0.5um)插入细胞内并注入DNA溶液。效率极高，还可直接将DNA送进核内，
动物病毒作为转移基因的载体，通常能导入个体，效率高。病毒载体要注意安全性。在构建载体时通常需将病毒的毒性基因删除，并有效防止病毒基因组在细胞内发生重组。
基因枪：在个体水平上进行转基因的另一种有效方法是采用高速微弹发射装置（high-velocity microprojectiles bambardment)俗称基因枪（gene gun)
也有报道：动物的表皮、肌肉与乳房等成功案例
细胞筛选建议配合我们噬斑实验套装，筛选成功率会大大提升。协和库细胞已到位（293)，各位老师有关注哪像指标可来信沟通（目的实验是，含血清方案上清液连续灌流收获目的蛋白、单细胞筛选、克隆、高产蛋白株筛选、工业用途用户，我们可完成上游交钥匙案例，用户可指定第三方参与评测，上游工艺部分全部自有，费用充足的公司，可考虑从细胞株构建开始，全新细胞系新株，理论部分以完备）